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rRTA DS27免疫毒素的制备及胞内运输研究 |
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裴武红 沈倍奋 黎 燕 贺永怀 王国华 张贺秋 汪宝珍
中国图书分类号 R392.11
摘 要 目的：探讨免疫毒素rRTA:DS27的内化行为。方法：用原核系统来获得重组蓖麻毒素A链(rRTA)；用胶体金双标记法进行Molt4细胞中免疫毒素的导向研究。结果：CM-Sephorose一步纯化到电泳纯的rRTA，电镜观察到rRTA:DS27遵循特异的胞内运输途径。结论：上述结果对于深入了解免疫毒素的作用机理，并进而改善其临床应用具有重要作用。
关键词 重组蓖麻毒素A链 免疫毒素 胶体金标记 内化 电镜
Preparation and intracellular routing of immunotoxin rRTA:DS27
PEI Wu-Hong,SHEN Bei-Fen,LI Yan et al.Beijing Institute of Basic Medical Sciences,Beijing 100850
Abstract Objective:To investigate the internalization of immunotoxin rRTA:DS27.Methods:Recombinant ricin toxin A chain were expressed in prokaryotic system.Immunogold double labelling method was used to study the intracellular routing of immunotoxin rRTA:DS27 in cultured Molt4 cells.Results:Recombinant ricin toxin A chain were purified to homogenity by one-step CM-Sephrose.Electron microscopy study showed that immunotoxin rRTA:DS27 was routing along with a specific intracellular pathway.Conclusion:These results may be helpful to deeply understand the targeting behavior of immunotoxins and further improve their clinical application.
Key words Recombinant ricin toxin A chain Immunotoxin Immunogold labelling Internalizatin Electron microscopy
免疫毒素是将一个具有特异性导向的单克隆抗体与一个强毒性的弹头蛋白进行化学交联而得到的，用于治疗肿瘤等顽症［1］。蓖麻毒素（ricin）是常用的弹头成分，由A、B两条链构成，其毒性部分A链是一种N-糖苷酶，可失活60 S核糖体，导致真核细胞的死亡。B链是一种半乳糖结合型蛋白，几乎可与所有的真核细胞上半乳糖受体相结合。天然的ricin作为弹头，存在的缺陷是，A、B链高度糖基化，在体内容易被网织内皮系统清除；B链会产生非特异性结合，影响了免疫毒素的导向特异性。用原核系统表达不杂有B链的、非糖基化的重组蓖麻毒素A链（recombinant ricin toxin A chain, rRTA），解决了以上问题，而且满足了医药上的大量需求［2］。目前，在细胞生物学的研究中，人们已对ricin的内化有了初步的了解［3，4］，但对免疫毒素的细胞内行为知之甚少，对于重组毒素所构建的免疫毒素的胞内导向报道，更不曾见到。我们用胶体金法研究重组蓖麻毒素A链所构建的免疫毒素的内化，了解其胞内运输及最终定位情况，对免疫毒素的作用机理研究，临床上的合理用药，以及进行一些有效的药效改善，无疑具有很重要的意义。
1 材料与方法
1.1 材料 重组质粒pET3b-rRTA，抗CD5的单克隆抗体DS27，携CD5抗原的Molt4细胞，BL21（DE3）菌株为本室保存；CM-Sepharose购自Pharmacia公司。
1.2 方法
1.2.1 rRTA的原核表达与鉴定 重组质粒pET3b-rRTA转化宿主菌BL21（DE3），转化子过夜活化后，1%接种于新鲜的LB-Amp培养基中，37℃培养至OD600 nm约0.6，加入I[1] [2] 下一页
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