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细胞增殖法检测单核 巨噬细胞ADCC效应方法的建立 |
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特异杀伤对照组：内有单核细胞和CTLL2细胞，效/靶细胞数比值为2∶1。③抗血清非特异毒性对照组：内有免疫兔血清和CTLL2细胞血清工作效价为1∶5 000，细胞浓度为1.6×104 ml-1。④CTLL2细胞增殖标准对照组：只有CTLL2细胞，其浓度分别为0.2×104、0.4×104、0.8×104、1.6×104 ml-1。上述各组均加入rhIL-2 100 U/ml，37℃CO2箱中培养72 h，将培养皿内细胞悬液移入试管中离心吸去部分上清，混匀管内细胞悬液移至40孔酶标反应板中，用改良的MTT比色法测定结果［7］。
1.2.5 实验结果计算 CTLL2细胞增殖标准对照组细胞增殖数按直线回归方程式计算，确定OD值与细胞数的相关性。单核细胞ADCC效应组CTLL2细胞数按下述公式计算：ODADCC＝ODt-(ODc-ODs)-(ODc-ODm)＝ODt-(2ODc-ODs-ODm)。ODADCC：单核细胞ADCC效应组实际OD值；ODt：单核细胞ADCC效应组测得OD值；ODc：CTLL2细胞增殖标准对照组OD值；ODs：抗血清非特异毒性对照组OD值；ODm：单核细胞非特异杀伤对照组OD值。将ODADCC代入CTLL2细胞增殖直线方程中，计算出ADCC效应组CTLL2细胞增殖数，最后用细胞增殖培养对照组细胞数减去ADCC效应组细胞增殖数，得出被杀伤细胞数。上述计算利用自编计算机程序完成。
1.2.6 125I-UdR 释放试验检测单核细胞ADCC效应方法参照文献［8］。
2 结果
2.1 免疫兔血清抗CTLL2细胞特异性抗体测定 表明免疫兔血清均产生出抗CTLL2细胞特异性抗体(图1)。
图1 免疫兔血清抗体特异性
Fig.1 Specificity of anti-CTLL2 Ab in the serum of the rabbit
Note:1 and 2 and 3.immune serum of the rabbits；4.serum of the normal rabbit；5.no serum dilution of the serum 1∶20
2.2 靶细胞数量变化时细胞增殖法和同位素释放法检测单核细胞ADCC效应的敏感性比较 结果显示细胞增殖法检测ADCC效应时，随CTLL2细胞数减少，曲线近似直线，细胞数减少至0.250×105以下时，OD值仍发生明显变化；当用125I-UdR释放试验检测ADCC效应时，CTLL2细胞较多的部分结果近似直线，当细胞数减少至0.250×105以下时曲线低平，说明125I-UdR释放法需要靶细胞数目较多，因此细胞增殖法结果较敏感(图2)。
图2 CTLL2细胞数与ADCC效应关系
Fig.2 The relationship between the number of CTLL2 cells and the ADCC effect of monocyte
Note:No.of monocytes is 5×104；dilution of immune srum is 1∶5 000：culture time of CTLL2 cells is 48 h
2.3 效应细胞数量变化时细胞增殖法和同位素释放法检测ADCC效应方法敏感性比较 结果表明效应细胞数在本实验条件下变化时，细胞增殖法检测ADCC效应曲线近似直线，而125I-UdR释放法检测ADCC效应时，效应细胞数在0.250×105以下时曲线低平，说明125I-UdR释放法需要效应细胞数目较多，而细胞增殖法在效应细胞数目较少情况下仍很敏感(图3)。
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