|
细胞增殖法检测单核 巨噬细胞ADCC效应方法的建立 |
| |
黄 瑾 马忠森 林树青 王荣有
中国图书分类号 R392-33
摘 要 目的：为了建立一种供临床实验室广泛应用的检测单核/巨噬细胞ADCC效应的实验方法。方法：选择CTLL2细胞作为靶细胞，制备出兔抗CTLL2细胞特异性抗血清，用单核细胞作为效应细胞，通过CTLL2细胞增殖结果检测单核细胞ADCC效应，并与传统检测方法125I-UdR释放试验进行比较。结果：该方法较同位素试验方法更敏感。结论：细胞增殖法检测单核细胞ADCC效应准确、可靠。
关键词 单核/巨噬细胞 ADCC 细胞增殖
Creation of the method of cell proliferation for detecting the ADCC effect of monocyte/macrophage
HUANG Jin,MA Zhong-Sen,LIN Shu-Qing et al. The Second Clinical College of Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130041
Abstract Objective:To create a method of detecting the ADCC effect of monocyte/macrophage in clinical laboratory.Methods:CTLL2 cells was selected as target cells to prepare the specific antiserum of rabbit.Monocytes act as effect cells.The ADCC effect of monocyte was detected by observing the proliferation of CTLL2 cells.This new method was also compared with the traditional method of 125 I-UdR releasing test.Results:The method of cell proliferation is more sensitive than that of isotope releasing test.Conclusion:Using cell proliferation method to detect the ADCC effect of monocyte is stable and accurate.
Key words Monocyte/macrophage ADCC Cell proliferation
单核/巨噬细胞ADCC效应是重要免疫学功能之一，在抗感染、抗肿瘤及抗寄生虫等方面均具有重要作用，与许多疾病的发生和发展密切相关［1-5］。传统方法多用同位素释放法检测单核/巨噬细胞ADCC效应，因同位素半衰期短不易保存且易污染等缺点，限制其临床的应用研究，因此本实验建立了细胞增殖法用于检测单核/巨噬细胞ADCC效应。
1 材料与方法
1.1 细胞株、试剂与动物 CTLL2细胞由本实验室长期传代培养；rhIL-2为卫生部长春生物制品所产品；酶标羊抗兔IgG为北京军科院产品；125I-UDR为北京原子能研究所产品；CBWR/B兔为本校动物中心提供。单核细胞取自健康人外周血。兔抗CTLL2细胞抗血清由本室制备。
1.2 方法
1.2.1 兔抗CTLL2细胞抗血清制备方法 参照文献［6］。
1.2.2 免疫兔血清抗体特异性测定 将CTLL2细胞固定，分3管，浓度为1×106 ml-1，分别加入免疫兔血清(工作效价为1∶20)、正常兔血清对照及空白对照，最后加酶标羊抗兔IgG，用含有OPD的磷酸、柠檬酸缓冲液显色，用酶标仪测OD490 nm值。
1.2.3 效应细胞的制备 无菌取人静脉血提取PBMC，调细胞浓度为1×106 ml-1，取1 ml倾入直径35 mm塑料细胞培养平皿内，37℃CO2孵箱中静置90 min，洗去非贴壁细胞，贴壁细胞为单核细胞，贴壁前后分别计数PBMC数，差值为单核细胞数。
1.2.4 实验分组及结果测定 ①单核细胞ADCC效应实验组：内有单核细胞、CTLL2细胞和免疫兔血清，效/靶细胞数比值为2∶1，血清工作效价为1∶5 000。②单核细胞非[1] [2] 下一页
上一个医学论文： 微量溶血分光光度法测定抗体形成细胞
下一个医学论文： rRTA DS27免疫毒素的制备及胞内运输研究
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文