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甲基硝基亚硝胍处理的vero细胞中磷酸化蛋白的差异显示 |
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孙雪敏 余应年 陈星若
摘 要 目的：初步了解哺乳类细胞非定标性突变形成是否与以蛋白质磷酸化级联反应为主要形式的细胞信号传导通路有关；方法：采用［32P］体内预标记及凝胶双向电泳方法差异显示甲基硝基亚硝胍(MNNG)处理组和对照组磷酸化蛋白，蛋白质免疫印迹杂交试验初步鉴定差异显示蛋白斑点性质；结果：在处理组发现两个与对照组不同的蛋白斑点，分子量分别在68×103和43×103附近，与抗酪氨酸磷酸化蛋白抗体未发生阳性反应；结论：根据差异显示蛋白斑点的分子量和印迹杂交试验结果，初步认为所见蛋白斑点可能为丝/苏氨酸磷酸化蛋白，且可能为丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)成员。
主题词 甲硝基亚硝胍；突变； 蛋白质类； 信号传递
Differential display of phosphorylated protein in MNNG treated vero cells
SUN Xue-Min, YU Ying-Nian, CHEN Xing-Ruo
Department of Pathophysiology and Laboratory of Medical Molecular Biology, Hangzhou (310031)
Abstract AIM：To explore the potential relationship between nontargeted mutagenesis and the cascades of protein phosphorylation of signal transduction pathways in cells. METHOD：Differential display of phosphorylated protein in cells treated with MNNG (methylnitronitrosoguanidine) and those with dimethyl sulfoxide (control) were performed with ［32P］ incorporation in vivo; Western blotting test was employed to identify the property of the protein. RESULTS：There are two differential displayed phosphorylated proteins reacted negatively with antiphosphotyrosine in MNNG treatment cells. CONCLUSION：The molecular weight of two proteins and the results of Western blot suggested that the two differential displayed phosphorylated proteins may be Ser/Thr phosphoproteins and probably members of the MAPK.
MeSH Methylnitronitrosoguanidine；Mutation; Proteins; Signal transduction
非定标性突变是发生在DNA损伤剂攻击部位之外的突变。在其特征和机制的研究方面，我们已经获得一些重要的线索，如突变的DNA序列特异性，提示与定标性突变有着不同的生成机制［1］；突变发生的时相关系，提示突变的形成需要有新合成蛋白质的参与［2］。最使我们感兴趣的是在哺乳类细胞基因转录或翻译被阻断的情况下，突变率的变化截然不同［3］。这一方面可以肯定非定标性突变形成过程中存在基因表达的改变，另一方面也说明了这种改变的复杂性。
近年来对DNA损伤反应的深入研究为探索非定标性突变形成机制提供了丰富的信息和广阔的思维空间。已知DNA损伤剂可引起多达几十种基因的表达改变或其产物修饰改变，最终细胞或者因获得修复而生存，或者走向程序性死亡。但是生存的细胞内仍可留有DNA损伤剂作用的烙印，即各种突变的存在。从最初的基因表达改变到最后的结局之间由细胞内一系列信号传导系统串联，其中蛋白质磷酸化级联反应是最主要的方式。有的蛋白激酶可直接由DNA损伤激活，如DNA依赖性蛋白激酶(DNA-activated protein kinase, DNA-PK)［4］，有的间接通[1] [2] 下一页
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