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Ang 对缺血缺氧性心肌胶原代谢的影响 |
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tensin system，RAS)［3］，并指出心脏局部可产生Ang－Ⅱ以及内皮素等生物活性因子。本文用异丙基肾上腺素(isoproterenol,ISP)注射大鼠，造成心肌坏死，作为缺血缺氧性心肌损伤的模型，探讨心肌局部在缺血缺氧坏死时某些生物活性因子含量及与胶原代谢的关系。
材料与方法
一、动物处理：
Wistar大鼠60只，雄雌各半，分成5组，每组12只，实验组皮下注射ISP1mg/kg，每日1次，共2日。于注射后3、7、14、21d用乙醚麻醉，眼球采血，处死动物，取心脏于液氮中保存。
二、组织匀浆制备：
取大鼠心脏，生理盐水冲洗后称重，按1∶9浓度(W∶V＝1g∶9mL)加入匀浆介质(0.15 mol/L，pH7.4 磷酸盐缓冲剂)，用电动玻璃匀浆器在4℃条件下制备组织匀浆。3000r/min离心15 min，吸取上清液用于生化或放免测定分析。
三、血清中GOT、CK、LDH、HBDH活性测定分析：
利用血清酶谱自动分析仪测定。
四、Ang－Ⅱ活性测定：
采用均相竞争法放射免疫分析测定血清和心肌组织匀浆中的Ang－Ⅱ含量。试剂盒为北京北方免疫试剂研究所产品。
五、ACE活性测定：
利用马尿酰甘氨酰甘氨酸在血管紧张素－Ⅰ转换酶的作用下水解成马尿酸及甘氨酰甘氨酸。用乙酸乙酯提取马尿酸，蒸干，溶于氯化钠液中，紫外228nm测定马尿酸含量，用ACE计算方法算出ACE含量。
六、心肌组织胶原蛋白含量测定：
心肌组织，去除心房心耳，匀浆，离心后沉淀部分用丙酮脱酯两天，支丙酮，110℃烤干组织，称干重，研成细末。称20mg干粉加入安瓶内，加6mol/L盐酸2mL，封口，130 ℃水解5h。冷却后调pH值为6，定容，滤过。取滤液按文献方法测定羟脯氨酸含量［4］。胶原蛋白含量(μg/mg 干组织)＝羟脯氨酸含量×7.4。
七、免疫组织化学染色：
将心脏组织从液氮中取出，置－20℃冰箱内平衡2h，然后放入10%蔗糖中过液。恒冷切片机切片(5μm厚)，置4%多聚甲醛中固定10min。然后应用ABC法做免疫组织化学染色。
八、统计处理：
全部实验数据经微机统计学程序处理，显著性检验采用方差分析。
结 果
一、血清GOT、CK、LDH、HBDH活性变化：
血清GOT、CK、LDH、HBDH活性变化在注射ISP 3d后最高，7d时有所下降，但都明显高于对照组。注射ISP 14d后，血清GOT、CK、LDH、HBDH活性变化与对照组无差异(表1)。
表1 注射ISP后不同时间血清GOT、CK、LDH and HBDH活性变化
Tab 1 The changes of activity of GOT、CK、LDH、HBDH in the serum of rats after injected ISP(U／L，±s)
Group n GOT CK LDH HBDH
3 d 11 183.96±46.83* 1238.74±438.23* 687.85±161.42* 687.85±161.42*
7 d 12 146.12±20.59* 972.48±214.31* 579.56±122.15 280.32±75.43
14 d 11 125.87±20.08 907.74±294.76 506.46±183.32 224.91±88.02
21 d 11 115.26±11.16 720.89±215.48 411.87±124.41 184.23±58.70
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