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肺表面活性物质对大鼠肺损伤后氧合功能的影响 |
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法
(一)实验动物与主要试剂：Wistar大鼠，200～250g，由中国医学科学院动物中心提供。黄嘌呤(xanthine,X)，黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)均为Sigma公司产品。PS按Notter方法从小牛肺灌洗液提取［5］。
(二)肺损伤模型的复制：
1.肺损伤：大鼠腹腔注射安定镇静后，仰卧固定，在颈正中皮肤作一小切口暴露气管，用OT注射器穿刺气管进行滴注。动物分为4组，每组8只。(1)对照组，气道不滴入任何溶液；(2)生理盐水组，气道滴入生理盐水(2mL/kg)；(3)X＋XO组，X(2.5μmol)与XO(1U)于气道滴注前同溶于生理盐水中；(4)X＋XO＋SOD组，除加SOD(2mg)外，其它同(3)组。滴注完毕后缝合切口，将动物放置笼中按常规饲养；24h后在机械通气的条件下进行肺功能测定。
2.肺功能测定：大鼠用戊巴比妥钠(50mg/kg,ip)麻醉后，行气管、右颈总动脉分离插管。然后将动物放置呼吸机－组合体积描记仪系统进行机械通气(纯
北京市自然科学基金资助
氧，呼吸频率：35/min，吸／呼＝1／1)；腹腔注射箭毒(1g/L,0.3mg/kg)以终止动物自主呼吸。记录仪描记潮气量和气道峰压。在整个通气过程中潮气量维持6ml/kg。通过计算潮气量与气道峰压比值得出动态胸肺总顺应性，颈动脉取血测动脉血气。
3.形态学观察和肺支气管洗出液生化分析：机械通气结束后，将动物开胸处死，剪下左肺称重，计算肺系数［左肺湿重(g)／体重(kg)］；常规切片，HE染色后光镜观察。用生理盐水(20 mL/kg，重复三次)经气管插管灌洗右肺，洗出液进行下列生化分析：(1)用Lowry方法测定蛋白含量(protein,Pr)；(2)用Bartlett法测定总磷脂(total phospholipid,TP);(3)用薄层层析分离磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)。
(三)PS替代治疗：按上述X＋XO组的方法造成肺损伤，24h后进行PS治疗实验。肺损伤动物分为3组，每组8只；(1)对照组：通气过程中不作任何处理；(2)PS组：通气平稳20min后气道滴入PS(100mg/kg)；(3)生理盐水组：气道滴入生理盐水(2mL／kg)。各组肺功能测定方法与上述相同。
(四)统计处理：所有数据以x±s表示，采用t检验判断均数差异显著性。
结 果
(一)肺损伤模型：各组动物气道滴注后均有不同程度的呼吸困难和紫绀，以X＋XO组最明显，其症状随时间转移而逐渐减轻。肺功能测定表明，各组PaCO2和pH值均无明显改变。但X＋XO组PaO2和胸肺顺应性都明显下降，SOD显示对肺功能有部分保护作用(表1)。
X＋XO组肺系数显著增大，与对照组和X＋XO＋SOD组比较分别为P＜0.01和P＜0.05(表2)；镜下观察可见明显的炎症性水肿。表2还显示肺支气管灌洗液生化分析结果，X＋XO组PC和TP含量显著下降，蛋白含量则显著增高。与X＋XO组比较，X＋XO＋SOD组只在PC值上表现出SOD的部分保护作用。
表1 气道滴注不同溶液24 h后大鼠动脉血氧分压和胸肺顺应性测定值
Tab 1 The values of PaO2 and lung-thorax compliance measured in rats in 24 h after intratracheal instillation of different solutions(±s，n＝8)
Group PaO2（kPa) Compliance(mL·kPa－1·kg－1)
15 min 30 min 15 min 30 min
Control 54.6±4.4 53.7±4.5 4.90±0.50 4.79±0.42
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