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牛磺酸对缺血大鼠心肌线粒体Ca2 |
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肾上腺素(isoproterenol, ISP)诱导的大鼠心肌缺血模型上观测Tau对缺血心肌Mit损伤有显著的保护作用［3］，表现为它能抑制缺血心肌Mit中MDA(丙二醛)的生成，减少膜磷脂降解和Ca2＋的堆积。本工作是在此基础上，进一步观测缺血大鼠心肌Mit Ca2＋-Mg2＋-ATP酶、Ca2＋-ATP酶活性变化与MDA含量的关系及Tau的作用特点，探讨Tau抗心肌缺血损伤的机理，为其临床应用提供实验依据。
材料与方法
1.主要试剂及仪器：SB-42多导生理记录仪，Lh-413型高速冷冻离心机(匈牙利产)，TGL-16型高速台式离心机(中科院上海生化研究所产)，Z 8000塞曼效应原子吸收分光光度计(日本产)。硫代巴比妥酸(上海试剂厂产品)，异丙肾上腺素(上海禾丰制药厂)，牛磺酸(Sigma公司)，ATP酶试剂盒购自南京建成生物工程研究所。其它试剂为国产分析纯或生化试剂。
2.实验动物与分组：雄性Wistar大鼠24只(本院实验动物中心供给，动物等级为Ⅰ级)，体重235～275g，随机分为：①缺血组(Ⅰ)：皮下注射ISP(5mg/kg)液，24h后再注射相同剂量1次。②缺血+牛磺酸组(Ⅰ+Tau)：注射ISP前30min腹腔注射Tau(200mg/kg)液，余皆同缺血组。③正常对照组(NC)：仅皮下注射与缺血组等体积生理盐水。以上3组均在每次注射后45min测心电图。心电图显示，缺血大鼠在ST段明显抬高，并出现异常Q波。各组动物均在第二次注射后60min断头处死。
3.心肌线粒体的分离［3］：大鼠处死后速取心脏置预冷的生理盐水中，去大血管，结缔组织，剪碎。置冷的250mmol/L蔗糖液(内含5mmol/L EDTA和10mmol/L Tris-HCl, pH 7.4中，用内切式电动匀浆器(700r/min，20S，间隔3S,共5次)匀浆。离心10min(800×g)，上清液再离心15 min(12000×g)，收集沉淀，然后用上述介质悬浮，重复离心两次即得。全部分离过程在0～4℃下进行。在2日内测定Ca2＋-Mg2＋-ATP酶和Ca2＋-ATP酶活性。以Lowry法进行蛋白定量。
4.MDA含量测定：取适量Mit，按TBA显色法测MDA含量，单位用nmol·mg-1蛋白表示。
5.ATP酶活性分析：将心肌Mit用10mmol Tris-HCl(pH 7.4)悬浮，按文献［4］方法测Ca2＋-Mg2＋-ATP酶和Ca2＋-ATP酶活性。酶的活性单位以每小时每毫克蛋白质分解ATP产生的无机磷的微摩尔数(μmol pi·mg-1·h-1)表示。
线粒体中钙含量测定用原子吸收分光光度法。
统计处理：数据以均数±标准差(±s)表示，计量资料组间比较用t检验，相关分析用直线回归。
结 果
1.心肌Mit中Ca2＋-Mg2＋-ATP酶和Ca2＋-ATP酶活性变化见表1，与NC组比较，缺血组心肌Mit中Ca2＋·Mg2＋-ATP酶和Ca2＋-ATP酶活性分别降低37.56%和50.20%，Ⅰ+Tau组的Ca2＋·Mg2＋-ATP酶和Ca2＋-ATP酶活性虽有下降趋势，但无显著差异。缺血组Ca2＋·Mg2＋-ATP酶和Ca2＋-ATP酶活性与Ⅰ+Tau组比较亦有显著降低(P＜0.05)
表1 心肌Mit蛋白中Ca2＋-Mg2＋-ATP
酶和Ca2＋-ATP酶活性变化
Tab 1 Change of Ca2＋-Mg2＋-ATPase
and Ca2＋-ATPase activities in the myocardial mitochondria
protein of rats (mmol·mg-1·h-1 ±s， n=8)
Group Ca2＋-Mg2＋-ATPase Ca2＋-ATPase
NC 104.65±8.57 46.35±7.98
Ⅰ 65.34±9.23* 23.08±5.67*
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