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不同病期支气管哮喘血清及PBMC条件培养液IL |
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近年认为哮喘是一种多细胞特别是肥大细胞、嗜酸粒细胞、T细胞参与的气道慢性炎症。细胞因子(cytokines,CK)是其重要炎症介质之一。现认为诸多CK如白细胞介素(interleukin,IL)2、4、5等均参与了哮喘的发病过程。有关哮喘时IL-8、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)水平的变化，国内报道甚少。为探讨IL-8、TNF-α在小儿哮喘发病中的作用，我们检测了不同病期儿童哮喘血清及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcytes,PBMC)条件培养液中IL-8、TNF-α水平。
材料与方法
一、对象：
按全国小儿呼吸道疾病学术会议制订的《儿童哮喘诊断标准和治疗常规》［1］，自儿科门诊和病房收集符合标准的哮喘患儿共53例次，按病期分为：(1)发作期：35例，男19例，女16例；平均年龄7.15岁(2.5～12岁)；平均病程3.5年(1.5～8年)；病情分度：轻度28例，中度7例；儿童哮喘29例，婴幼儿哮喘6例。均有明显喘息症状，肺部可闻哮鸣音。(2)稳定期：18例。男8例，女10例；平均年龄7.57岁(3.5～13年)；平均病程4年(2～7.5年)；儿童哮喘17例，婴幼儿哮喘1例。本组中15例为急性发作期患儿处于稳定期。随访时间0.5～2年，平均1.25年。本组患儿均无临床症状，近6周内无哮喘发作及呼吸道感染症状，未服用β2激动剂、茶碱及糖皮质激素；能参加正常学习及一般体育活动。10例(≥5岁)测定其呼气峰流速(peak expiratory flow,PEF)均超过其预计值80%以上。(3)正常对照组：28例。男15例，女13例；平均年龄5.53岁(2～7.5岁)。均来自儿童保健门诊、幼儿园。体格检查无近期感染征象，无个人或家族过敏史。
二、方法：
(一)标本采集：取受试者空腹静脉血(肝素抗凝)3～5mL，分离血浆置于-30℃以下待测；血细胞部分当日行PBMC体外培养。发作期患儿均于哮喘发作1～3 d内或应用激素前采血；稳定期患儿取血至少距第一次采血3个月以上，且近6周无哮喘发作。
(二)PBMC体外诱生IL-8、TNF-α方法：无菌肝素抗凝静脉血3～5mL，淋巴细胞分离液常规分离PBMC，以含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调细胞浓度为1×106／mL，每份标本均做双管培养，一管加入植物血球凝集素(phytohemagglutinin, PHA)，终浓度100mg/L；另一管不加PHA(空白对照)。两管均在37℃、体积分数为5%CO2条件下培养48h,离心后无菌收集培养上清液，-30℃以下保存，备测IL-8和TNF-α水平。
(三)PBMC条件培养液及血清IL-8、TNF-α浓度测定：采用双抗体夹心ELISA法。第四军医大学免疫学教研室提供IL-8、TNF-α试剂盒。按说明书操作。
三、统计处理：
采用SAS软件对各组数据进行F、x2、t检验，以及Newman-keuls(q)检验，有关指标间行直线相关分析。
结 果
(一)哮喘患儿不同病期血清CK水平变化(表1)：结果表明发作期血清IL-8水平高于稳定期和对照组(q为9.545、11.531、P均＜0.01)，而稳定期与对照组无显著差异(q为0.511，P＞0.05)；发作期血清TNF-α水平高于稳定期和对照组(q为2.966、6.652，P＜0.05或0.01)，稳定期与对照组间无显著差异(q为2.736，P＞0.05)。以对照组±2s为正常上限(即IL-8=0.639 μg/L)，TNF-α=0.363μg/L),哮喘发作期血清IL-8、TNF-α增高百分率分别为74.28%、51.43%，显著高于稳定期。
表1 不同病期哮喘患儿血清IL-8、TNF-α水平变化
Tab 1 Changes of concentrations of serum IL-8 and TNF-α
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