|
维生素D3引起大鼠血管钙超载对血管L |
| |
的因子之一，组织钙超载对EDRF/NO生成的影响环节尚不清楚。本工作在维生素D3（Vitamin D3，Vit D3）引起的大鼠血管钙超载模型上，观察血管L-精氨酸(L-Arginine, L-Arg)/NO系统的变化，并观察口服L-Arg对血管钙超载的防治作用，以探讨钙超载引起血管功能损伤的机理。
材料与方法
一、钙超载模型制备：
雄性Wistar大鼠(体重200～250g)实验分3组，①Vit D3组：参照Chatelain等人［1］的方法给大鼠肌肉注射Vit D3（300000IU／kg)，然后每5d照射紫外线一次(20min/次)，共3次。②L-Arg治疗组：Vit D3注射和紫外线照射同Vit D3组，但动物饮水含有0.5%L-Arg,L-Arg的摄入量约为0.7 g·kg-1·d-1。③对照组：除肌注生理盐水0.2mL外不作特殊处理，亦不照射紫外线。
实验各组动物在注射Vit D3后第16d用乌拉坦(1g/kg)ip麻醉，由股静脉注射肝素(1000U/kg)抗凝。右侧颈总动脉插管，经换能器在四导生理记录仪(RM6200，日本)上测定大鼠平均动脉血压(mean arterial blood pressure, MABP)。然后剪开胸、腹腔，取心脏和胸腹主动脉(全长)，分别进行下述实验。
二、血管及心肌组织钙测定［2］：
取心尖(约50mg)和胸主动脉(5～10mg)后置烤箱彻底干燥。硝酸消化，在原子吸收分光光度仪(422.7nm)上测定组织钙含量。以μmol/g干重表示。
三、血管组织NO2释放和一氧化氮合酶(NO synthase, NOS)活性及cGMP含量测定：
将上述各例测钙后余下的主动脉，制备成约0.5mm的切片(Slice)［3］，按50g组织/L加入含1%牛血清白蛋白的Kreb′s液，在37℃恒温振荡水浴上，以体积分数为95%O2～5％CO2持续平衡孵育，30、60和90min时各取孵育液0.1mL，按Greiss法测定NO2含量，换算为主动脉释放的量(μmol/g干重)。孵育后的血管组织，取约15mg用放射免疫法测定cGMP含量［4］。余下组织按张新波［5］报告的方法测定总NOS活性。蛋白定量用考马斯亮兰比色法。
四、血管组织3H-L-Arg转运测定［6］：
取三组和各主动脉制备切片，每例均分十管，每管加入Kreb′s液1.0 mL,分别含0.01～10.0 mmol/L L-Arg(加入［3H］-L-Arg浓度为3.7×1010Bq/mol)，在37℃恒温水浴中孵育1min，(预试发现在2min内，组织［3H］-L-Arg摄入与孵育时间呈直线关系)，立即用2mL冷Kreb′s液终止反应，并冲洗3次。取出组织用0.5mL甲酸消化，考马斯亮兰行消化液蛋白定量。取0.2mL消化液加入闪烁液，在β液闪计数仪(FJ-2107型)上测定［3H］放射活性，计算组织摄取L-Arg量，以nmol·mg-1pr·min-1表示。
五、材料：
Wistar大鼠由北京医科大学实验动物部提供。L-［2,3,4,5-3H］-Arg(229.4×1013Bq／mol)为Dupont NEN产品。cGMP放免药盒由上海中医药大学提供。L-Arg为Sigma产品。Vit D3为上海第九制药厂产品。其余试剂为市售分析纯。
六、实验数据以±s表示，多组资料用方差分析组间q检验统计学处理。
结 果
一、实验各组动物心肌和血管组织钙含量比较：
与对照组相比较，钙超载动物MABP轻度增高(+10.39%,P＜0.05)，心肌和血管组织钙含量分别增加约4倍和10倍(P＜0.01)。而L-Arg治疗组与Vit D3组相比较，血压轻度降低(-3.91%)，但无明显差异(P＞0.05)，而心肌和血管组织钙含量分别降低45.33%和25.49%(P＜0.01)。结果见表1所示。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： helical CRH 9 41 与消炎痛联用对家兔内毒素性发热的解热作用
下一个医学论文： 不同病期支气管哮喘血清及PBMC条件培养液IL
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文