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低剂量辐射增强小鼠胸腺细胞PKC亚型的表达 |
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in)和75mGy(剂量率12.5mGy/min)。
三、荧光抗体标记：
PKC-α，PKC-β1及PKC-β2多克隆抗体(Santa Cruz，美国)，羊抗兔IgG-FITC(Jackson,美国)，PMA(Sigma)。调单细胞悬液为1×107／mL，(悬于含10%新生小牛血清的RPMI 1640培养基中)，然后加入PMA，终浓度为100nmol/L，于37℃，体积分数为5%CO2孵箱中培育，20min后用PBS洗二次，加第一抗体PKC-α,PKCβ1，PKCβ2(1∶50稀释)50μL,4℃反应45min，PBS洗涤二次，加第二抗体羊抗兔IgG-FITC(1:100稀释)20μL, 4℃反应45min，PBS洗二次后进行FCM分析。
四、用Coulter Elite流式细胞仪对细胞进行FCM多参数分析，激光光源15 mW氩离子激光，波长488nm,收集10000个细胞，进行FCM分析。
五、所有数据均以平均数和标准差(±s)表示，各组之间的数值比较采用两样本均数t检验。
结 果
一、PKC-α的表达：
PKC-α阳性细胞数在75mGy X射线照射后12h及24h明显增加，而4Gy X射线照射后数量明显下降，见表1。
表1 75mGy与4Gy X射线全身照射后胸腺细胞PKC-α的表达
Tab 1 The expression of PKC-α in thymocytes at
different time intervals after WBI with
75mGy and 4 Gy X-rays (±s，n=5)
Time after irrad Percentage of PKC-a positive cells
Sham 75 mGy 4 Gy
4 h 11.64±1.61 13.38±2.25 9.98±1.52
12 h 13.90±2.16 21.94±4.33** 7.76±2.14**
24 h 10.86±1.50 16.75±2.80** 6.84±1.95**
48 h 10.10±2.32 10.80±2.18 8.76±1.93
*P＜0.01， vs sham
二、PKC-β1的表达：
由表2可见75mGy X射线照射后4、12、24、48h，PKC-β1表达均增强，12h达峰值。4Gy照射后胸腺细胞PKC-β1的表达仅在24h稍降低，但差异不显著。
三、PKC-β2的表达：
由表3可见75mGy X射线照射后12h及24h PKC-β2表达增强，48h恢复到假照水平。4Gy照射后4 h胸腺细胞PKC-β2的表达稍有增高，其它时间呈降低趋势，但均无明显差异。
表2 75mGy与4Gy X射线全身照射后胸腺细胞PKC-β1的表达
Tab 2 The expression of PKC-β1 in thymocytes at different time
intervals after WBI with 75mGy and 4Gy X-rays (±s，n=5)
Time after irrad Percentage of PKC-β2 positive cells
Sham 75 mGy 4 Gy
4 h 9.42±1.61 12.34±1.37* 9.74±5.09
12 h 9.74±1.46 25.60±7.36** 9.50±3.21
24 h 8.45±1.37 20.02±2.17** 6.74±2.78
48 h 7.60±1.10 14.01上一页 [1] [2] [3] 下一页
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