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快速高效的DNA连接 |
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u;l反应液中的4μl, 使用λDNAin VitroPacking Kit进行体外包装, 形成噬菌体粒子, 并以此感染Ecoli Y1090 (r-) 形成透明噬菌斑, 表2显示其感染结果。同时以T4 DNA Ligase (350U), 在26℃的连接反应作对照。结果同样表明, 使用DNA Ligation Kit Ver.2 时的连接效率比使用T4 DNA Ligase时的连接效率高。
表2 线形DNA在使用DNA Ligation Kit Ver.2和 T4 DNA Ligase时的连接效率比较
反应时间 DNA Ligation Kit Ver.2 T4 DNA Ligase
10min 8.5×106 1.6×106
16hr -- 3.1×106
表中的数字为透明噬菌斑数/μgλgtll。
4 结论
DNA Ligation Kit Ver.2 的主要特点是方便、高效、快速。为实验成功提供了速度, 提供了可靠的保证。在进行环状DNA连接时, 只要加入与DNA溶液 (Vector DNA+Insert DNA) 等量的试剂盒的SolutionI便可进行连接反应。而在线形DNA连接时, 也只需加入与DNA溶液等量的Solution Ⅱ 及2倍的Solution I就可以进行连接反应了。本试剂盒的研制成功, 牭玫搅藣海内外同行的一致好评, 并引起了不同反响, 深得行家们的青睐。愿本方法和TaKaRa试剂盒的应用有助于生物工程的研究, 为更多的科研工作者提供便利。
作者单位：陈严 汤敏谦 宝生物工程(大连)有限公司,大连116600
参考文献
1 Hayashi Ket al.Stimulation of intermolecular ligation withE. coliDNA ligase by high concentrations of monovalent cations in polyethlene glycol solutions. Nucleic Acids Res., 1985, 13(22): 7979～7992
2 Hayashi Ket al.Regulation of inter- and intramolecular ligation withT4 DNA ligase in the presence of polyethlene glycol. Nucleic Acids Res., 1986, 14(19): 7617～7631
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