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大鼠脑干向面口部运动核的P物质能和脑啡肽能投射 |
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pool might have regulatory and control effects on orofacial motoneurons in the brainstem orofacial motor nuclei,which innervate orofacial muscles to carry out complex orofacial movements.
【Key words】 Brainstem orofacial motor nuclei;Premotor neuron;Substance P;Enkephalin;Rat
脑干的三叉神经运动核(Vm)、面神经核(Ⅶ)和舌下神经核(ⅩⅡ)的运动神经元主要支配面口部的咀嚼肌、表情肌和舌肌，与面口部的一系列复杂而精细的功能活动，如咀嚼、表情和发音等有密切的关系。这些运动神经元的机能活动主要由直接接受大脑运动皮质下行投射的脑干运动前神经元(premotor neuron)调腔［1～3］。脑干运动前神经元主要位于臂旁核簇、三叉上核、中缝核簇和脑干网状结构［4～6］，猫运动前神经元所含的神经活性物质已有了一些报道［7，8］，而在大鼠，仅有5-羟色胺(5-HT)能和去甲肾上腺素能运动前神经元的研究结果［9～11］。大鼠的脑干面口部运动核内均有密集的SP样和ENK样阳性终末，SP对运动神经元具有兴奋性作用［12］，但这些SP样和亮氨酸脑啡肽(L-ENK)样阳性终末的来源及其与在猫的研究结果有何异同，则未见文献报道。本研究用荧光金(FG)逆行追踪与免疫荧光组织化学染色相结合的双标技术，对大鼠脑干向面口部运动核的SP能和L-ENK能投射进行了观察。
材料和方法
雄性SD大鼠30只，体重200～250g。戊巴比妥钠麻醉(40mg/kg,腹腔麻醉)后，将0.1μl的2%FG用尖端粘接微玻管的微量注射器经压力分别注入Vm(10只)、Ⅶ(10只)或ⅩⅡ(10只)，注射时间20min，注毕留针20min。动物存活48h后再次麻醉，将10μl的1%秋水仙素注入侧脑室。动物再存活12～24h后，用过量戊巴比妥钠深麻，开胸，插管至升主动脉，先以100ml的生理盐水冲去血液，再用500ml含4%多聚甲醛和0.05%苦味酸的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)灌注固定1h。注毕立即取脑，用上述新鲜固定液后固定4～6h(4℃)，再移入30%蔗糖中至沉底(4℃)。冠状冻切脑干，片厚30μm，切片隔3张取1张，分4套收集于0.01mol/L PBS(pH7.4)中，每套切片约60～70张。将每只动物的第1套切片裱于载片，干燥后荧光显微镜观察，选注射区分别位于Vm(5只)、Ⅶ(5只)和ⅩⅡ(5只)的切片，行免疫荧光组织化学染色，具体步骤如下：(1)每只动物的第2、3套切片分别入兔抗SP血清(1∶5 000,INC)、兔抗L-ENK血清(1∶3 000,INC)，室温孵育18～24h;(2)Biotin标记的羊抗兔IgG血清(1∶200,Vector)，室温孵育4h;(3)Avidin结合的Texas Red(1∶1 000,Vector),室温孵育2h。抗体和复合物的稀释均用含0.3%Triton X-100和5%正常驴血清的PBS。裱片、避光干燥、封片。在荧光显微镜下观察、计数并摄片。选择激发波长为350～380nm和发射波长为530～590nm的滤色片观察黄色或黄白色的FG标记神经元，激发波长为590nm和发射波长为≥615nm的滤色片观察红色的Texax Red标记的免疫荧光染色阳性神经元。第4套切片用Nissl染色，以便对照观察。
结 果
在将FG分别注入Vm、Ⅵ或ⅩⅡ的30只大鼠中，有15只动物的FG注射区局限于Vm、Ⅶ或ⅩⅡ。在这些动物，FG逆标神经元主要见于脑桥和延髓网状结构外侧部及其外侧的一些结构，如臂旁外侧核(LPB)、臂旁内侧核(MPB)、K-F核、三叉上核(Sup V)和三叉间区(JuxV)。在中脑网状结构、延髓网状结构内侧部的巨细胞网状核α部(Rgcα)、大细胞网状核和旁巨细胞外侧网状核、延髓中缝核簇的中缝大核(NRM)、中缝苍白核(RPa)和中缝隐核(ROb)、三叉神经感觉主核(Vp)和三叉神经脊束核也能见到一些FG逆标神经元。少量FG逆标神经元还见于Cajal中介核、Darkschewitsch核、E-W核、中脑导水管周围灰质(PAG)、中缝背核(DR)、中缝正中核(MnR)、外侧丘系核、蓝斑下区、背外侧被盖核(DLTg)和延髓外侧网状核(LRt)。上一页 [1] [2] [3] 下一页
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