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烫伤大鼠室旁核和触液神经元中胆囊收缩素的变化 |
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.In ependyma of the third ventricle the number,sectinal areas,and immunostaining intensity of CCK-positive CSF-CNs were more,larger,and heavier than that of the control respectively.Conclusion These implied that CCK synthesis in somas of the PVN and the releasing in terminals of the ME during scalding stress were increased.The emergence of CCK-containing CSF-CNs might provide their secretory products a new pathway to cerebrospinal fluid (CSF) after scald and the CCK,through the CSF pathway,might involve scald stress by modulating the metabolism and activity of the adjacent peptidergic system controlling the pituitary.
【Key words】 Scald;Stress;Cholecystokinin(CCK);Paraventricular nucleus(PVN);Cerebrospinal fluid-contacting neuron(CSF-CNS)
胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)是中枢神经系统含量最高的神经肽之一，广泛分布于大脑皮层、海马、杏仁核和丘脑下部，主要以硫化CCK-8的形式存在。已有文献报道，CCK参与多种应激反应［1，2］。较大面积的皮肤烫伤使机体进入严重的损伤性应激状态，发现丘脑下部对此反应十分强烈［3，4］，表现为烫伤后某些神经肽含量发生变化。但对丘脑下部室旁核(paraventricular nucleus,PVN)中CCK神经元是否参与烫伤应激反应鲜见文献报道。
此外，在人和其他哺乳动物脑内存在接触脑脊液的神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons,CSF-CNs)，尤以第三脑室较多见［5］。Scott［6］用扫描电镜技术观察到大鼠60%皮肤烫伤后其第三脑室壁较之对照组附着更多的CSF-CNs,并用免疫组织化学证实这些CSF-CNs含酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase)。近来有文献报道大鼠CSF-CNs中还含有CCK。鉴于CSF-CNs处于脑组织和脑脊液之间的特殊位置，参与了正常情况下脑-脑脊液神经体液回路的调节［7］，是维持神经元微环境稳定不可缺少的成分。因此有理由认为含CCK的CSF-CNs也可能参与烫伤应激反应。为此，本实验用免疫细胞化学和显微图像分析技术研究烫伤大鼠PVN和第三脑室室管膜内CSF-CNs中CCK含量的变化，旨在探讨PVN中CCK是否参与烫伤应激反应，并为CSF-CNs在应激状态下如何平衡脑-脑脊液神经体液回路提供形态学依据。
材料和方法
1.动物与分组
成年雄性Wistar大鼠20只，按随机配对的原则分为4组。第1组于伤后24h经侧脑室按1mg/kg注入秋水仙素，用于观察PVN和第三脑室室管膜内的CCK阳性细胞；第3组不经秋水仙素处理，用于观察ME的CCK阳性纤维。第2、4组分别为第1、3组的对照组。动物模型制备按第三军医大学烧伤研究所提供的方法进行，即将实验组动物于清醒状态下捆绑固定，背部剃毛后浸入95℃恒温水浴锅15s，造成25%Ⅲ度皮肤烫伤，致伤时间均在上午10～12时进行，对照组动物捆绑固定剃毛后用温水浸泡背部。伤后24h取材(秋水仙素处理组于注射后12h取材)。
2.试剂
兔抗CCK血清购自美国Immune Nuclear公司，工作浓度1∶3 500；生物素化的羊抗兔IgG购自美国Vector公司，工作浓度1∶200；ABC复合物购自美国Vector公司，工作浓度1∶100。
3.免疫组织化学程序
动物经戊巴比妥钠腹腔麻醉，经左心室插管至升主动脉，生理盐水冲洗血管，Zambonis液灌注固定。6h后剥脑修块，入相同固定液于4℃后固定6～8h，上一页 [1] [2] [3] 下一页
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