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大鼠骶尾腹内侧肌的运动神经分布 CB |
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in each group.On the side these labeled neurons formed rich dendritic plexes beneath pia mater in L6-S3 segment.Conclusion It proved that the SCVM is not only the largist of target muscles of Onuf s,but also it possesses rich sub-pia dendritic plexes,those specialities would prove a new research field for us exploring the special neurochemical and neuropathologic changes in some motoneuronal diseases.
【Key words】 Musculus sacrococcygsus ventralis medialis;Innervation;Onufs nucleus;Rat
大鼠骶尾腹内侧肌又称荐尾腹侧中肌(musculus sacrococcygeus ventralis medialis)或屈尾短肌(musculus floexor caudae brevis),是位于盆腔后壁、骶椎前方的一对梭形肌肉，属尾肌群，因其功能似乎仅为屈尾，故至今尚未引起人们的注意，而与该肌位置关系较密切的会阴肌因在某些运动神经元疾患时仍可保持其正常生理功能而一直受到神经工作者的关注，尤其是近年来有诸多文献报道了会阴肌的神经支配、相关神经元的细胞构筑、神经递质和神经调质的分布以及纤维联系特点［1～10］，藉以探讨运动神经元疾病的神经病理学。我们的实验发现了骶尾腹内侧肌的神经分布与会阴肌相同，即受脊髓腹侧角运动神经元腹侧群和Onuf核的双重神经支配，至今尚未见国内外有报道。
材料和方法
1.动物分组及试剂
实验用Wistar大鼠(中国医学科学院繁育场提供)20只，雄性，体重150～250g，分为3组，A组：骶尾腹内侧肌CB-HRP注射组(n=10);B组：骶尾背内侧肌CB-HRP注射组(n=4)；C组：骶尾腹内侧肌CB-胶体金注射复合CGRP免疫组织化学双标组(n=6)。
本实验所用CB-HRP和CB-胶体金(金颗粒平均直径7nm,CB含量1.47g/L)均为中国医学科学院基础医学研究所神经生物学教研室自制。
2.手术及取材
动物行戊巴比妥钠腹腔麻醉(40mg/kg,腹腔注射)，A、C组仰卧位固定，做会阴部切口，经直肠后间隙找到位于骶骨腹侧的骶尾腹内侧肌，用微量注射器向一侧肌肉内行单针孔多点注射，A组注射CB-HRP10μl/只，C组注射CB-胶体金100μl/只，注射完毕留针5min后，针孔处作双重结扎，以免药液外漏。B组俯卧位固定，切开骶骨背侧皮肤，取上述相同进针方式，向一侧骶尾背内侧肌注射CB-HRP10μl/只。
A、B组存活72h，C组存活120h，戊巴比妥钠深麻下(60mg/kg,腹腔注射)行左心室-升主动脉穿心灌注。A、B组先灌注生理盐水150ml/只，继之以混合固定液(1%多聚甲醛、1.25%戊二醛，0.1mol/L PB配制，pH7.4)350ml/只；C组灌注生理盐水50ml/只，混合固定液(4% 多聚甲醛、0.25%戊二醛，0.1mol/L PB配制，pH7.4)300ml/只，灌毕取L3至全部骶髓，原液后固定2h(4℃)，然后入30%蔗糖磷酸缓冲液中过夜(4℃)，次日行冰冻连续切片，片厚40μm，收集于5%蔗糖磷酸缓冲液中备用。
3.显色反应及免疫组织化学反应
A、B组切片充分漂洗后行TMB-硝普钠反应显色［11］，顺序贴片、干燥、复染、透明封片，光镜下明、暗视野观察计数并摄片。
C组切片充分漂洗后先行银加强染色［12］，然后取L6～S3节段的加强后切片进行CGRP-免疫组织化学反应。CGRP一抗(Cambridge Research Biochemical Limited)稀释度1∶4 000，4℃孵育48h；生物素化二抗(DaKo Ltd.)稀释度1∶400，室温孵育4h；0.3%H2O2和甲醇混合液浸片30min，然后用1∶400过氧化物酶结合链球菌亲和素(peroxidase-conjugated streptavidin DaKo Ltd.)室温孵育2h;DAB/H2O2呈色5～10上一页 [1] [2] [3] 下一页
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