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大鼠心脏腺苷预处理琥珀酸脱氢酶电镜细胞化学的变化 |
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reperfusion,which is similar to the effect of ischemic preconditioning.
【Key words】 Adenine sulphate; Ischemic preconditioning; Succinic dehydrogenase; Heart; Rat
自1986年Murry［1］首次发现狗心肌缺血预处理(ischemic Preconditioning, IPC)以来，新近研究证实［2，3］，IPC是调动心肌自身抗缺血的有效途径，但该方法对机体具有损伤性以致限制其实际应用。鉴于腺苷是IPC过程中重要的心肌保护物质［2］，本研究以外源性腺苷前质——硫酸腺嘌呤注入大鼠以复制腺苷预处理，并与缺血预处理对比，通过琥珀酸脱氢酶电镜细胞化学变化的观察，探讨抗心肌缺血效应，为探索非创伤性预处理积累实验资料。
材料和方法
取体重200～300g SD雄性大鼠，以20%乌拉坦(5ml/kg)腹腔麻醉后，固定于鼠台，以针形电极插四肢皮下观察记录标准Ⅱ导联心电图。行气管插管，连接微型动物呼吸机行人工呼吸。经左侧第4肋间开胸，暴露心脏，用3/0号丝线在左冠状动脉前室间支中、上1/3交接处穿线备用。取心电图正常鼠24只，分以下4组，每组6只。
Ⅰ组：正常对照组(normal control group,NC)，取上述处理大鼠，穿线但不结扎，旷置50min。
Ⅱ组：缺血再灌注组(ischemic/reperfusion group,I/R)，以乳胶片垫底，双活结结扎前室间支，以心电图S-T段明显上抬，结扎线以下心肌颜色变暗为心肌缺血标志，30min后松开结扎线，恢复血液20min。
Ⅲ组：缺血预处理组(ischemic preconditioning group,IPC),按经典的Murry法［1］复制，即在持续结扎冠状动脉30min前，反复4次结扎该血管5min，间隔再灌注5min。
Ⅳ组：硫酸腺嘌呤预处理组(adenine sulphate preconditioning group,ASPC),于心肌缺血再灌前15min，在5min内由舌静脉滴入硫酸腺嘌呤(1.5mg/kg体重)，后按Ⅱ组方法行缺血再灌注。
各组动物于实验结束时，速取左室心肌，固定于pH7.6的2%多聚甲醛，30min以内在AO恒温冷箱切片机中进行冰冻切片，按Nitro-BT法显色，用Olympus镜按顺序连续观察每张切片中的20个油镜视野，每组共观察100～120个油镜视野，并进行半定量计数及摄片；按小川［4］的亚铁氰化铜法制作电镜用的SDH标本，反应后冷缓冲液洗30min，用2.5%戊二醛固定2h，再用1%锇酸后固定1h，乙醇梯度脱水，环氧树脂包埋，超薄切片，枸橼酸铅和醋酸双氧铀染色，透射电镜(H-600)观察、摄片。SDH对照实验，在孵育液中除去琥珀酸钠。光镜观察SDH反应参照Niles等［5］分级法分为4级，Ⅰ级为相对正常心肌，心肌肌原纤维清晰，酶反应区为排列整齐、大小均匀的蓝色颗粒；Ⅳ级显示肌原纤维模糊不清，酶反应颗粒大小不一，分布散乱，显示线粒体肿胀，膜通透性增高，SDH外漏，酶活性降低及心肌受损严重。接近Ⅰ级者为Ⅱ级；接近Ⅳ级者为Ⅲ级。光镜结果按Ridit法进行显著性测验。
结果
1.光镜观察
光镜下SDH反应产物主要定位于肌纤维之间，结果见附表。由于Ridit值和酶活性及心肌损伤程度呈负相关，结果提示，Ⅱ组酶活性降低明显，心肌损伤严重；Ⅳ组最轻，Ⅲ组界于其间。对照实验为阴性、不显色。
附表 各组SDH细胞化学变化的Ridit分析
Table The analysis of Ridit on changes of SDH cellochemistrily
组别
groups 反 应 级 别
grads of reaction
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 合计
total
正常对照组
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