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碱性成纤维细胞生长因子对兔血管舒张功能及左旋精氨酸 一氧化氮途径的影响 |
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于下述实验。
一、血管舒张反应测定［3］：
取约3 mm长胸主动脉环两段，分别保留内皮和擦拭去内皮，置于37℃，体积分数为95% O2-5%CO2平衡的Krebs-Henseleit(KH)液含10-7 mmol/L消炎痛的浴槽中，经调节静止张力0.5 g，10-7 mol/L去甲肾上腺素(NE)收缩达平台后，分别加入不同浓度的bFGF，经张力换能器，在记录仪上记录其舒张反应。
二、主动脉薄片孵育：
按Abbort等［4］方法制备主动脉0.5 mm厚薄片，按每50 mg湿重加入1 mL KH液，实验分为对照组和bFGF组(bFGF终浓度为100 μg/L),在37℃恒温振荡水浴上，通体积分数为95% O2-5%CO2持续孵育3 h，然后进行下述测定。
三、孵育液NO-2测定：
取孵育液1 mL按Green等［5］方法，测定NO终末代谢产物NO-2含量，以nmol/mg WW表示。
四、主动脉［3H］－L-Arg转运测定［6］：
分组及血管薄片孵育方法同上，孵育3 h后，加入［3H］-L-Arg浓度为0.01～10 mmol/L，孵育1 min，立即用2 mL冷的KH液终止反应，并充洗3次，取出组织用0.5 mL甲酸消化考马斯亮兰法测定消化液蛋白含量。取0.2 mL消化液，加入闪烁液，在β闪烁计数仪(FJ-2170)上测定放射强度，计算摄入的Arg量，以nmol.min-1.mg-1蛋白表示。
实验结果以±s表示，方差分析，组间q检验作统计学处理。
结果
一、bFGF具有内皮依赖的舒张血管作用：
对NE收缩的血管，bFGF有浓度依赖的舒张作用，Emax为(2.82±0.46)g，EC50为(23.27±4.60)nmol/L,去内皮组血管对bFGF的舒张反应显著低于对照组Emax为(0.40±0.06)g,EC50为(6.60±0.58)nmol/L(P＜0.01)，结果见图1所示。
二、bFGF刺激主动脉NO释放：
对照组和加bFGF组(100 μg/L)孵育液NO-2含量分别为(5.60±0.34)nmol/mg.pr(n＝5)和(7.99±0.52)nmol/mg pr(n=5)，比对照组增加43%。
Fig 1 Effects of bFGF on aortic relaxation in rabbit (±s, n=5)
图1 bFGF对兔主动脉舒张反应的影响
三、bFGF促进［3H］-Arg的转运：
主动脉组织对L-Arg转运呈高和低亲和两种方式，见图2所示，用Eadie-Hofstee Plot分析，bFGF孵育虽然增加血管低亲和转运的最大速度Vmax(45%,P＜0.01)，但不影响高亲和转运Vmax，也不影响高和低亲和的K（m）值，结果见表1所示。
表1 bFGF对兔主动脉L-Arg转运最大速率及米氏常数影响
Tab 1 Effects of bFGF on aortic L-Arg transport(±s,n=5)
Transport Vmax (nmol.min-1.mg-1) K（m）(nmol/L)
Low affinity High affinity Low affinity High affinity
Control 9.60±1.13 2.03±0.24 1.09±0.09 0.028±0.001
bFGF 13.95±1.73** 1.99±0.26 1.24±0.09 0.029±0.001
**P＜0.01，vs control
Fig 2 Effects of bFGF on kinetics of aortic ［3 H］－L－Arg transport in rabbit(±s，n＝5)
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