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非创伤缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌的作用 |
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yocardium and CK in serum(P<0.01).Besides, the activity of SOD of myocardium increased in non-wounded legs ischemic preconditioning group. CONCLUSION:Non-wounded legs ischemic preconditioning has protective effects on the I/R myocardium approximating to classical ischemic preconditioning. MeSH Rats; Myocardium;Reperfusion injury
由Murry等发现并经许多学者所证实的缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)具有缩小心肌梗塞范围,改善受损的亚细胞结构,恢复心肌功能[1,2]等作用而引人注目。但经典缺血预处理方法是开胸通过数次短暂的心肌缺血诱发IPC效应,从而限制了其临床应用。鉴于经典预处理方法的基本原理是心脏反复短暂缺血所致的缺氧,同时考虑到远隔器官的缺血缺氧也可模拟心脏的IPC效应[3]及区域性IPC能产生全心肌保护作用[4],于是作者拟以“捆绑法”复制大鼠双下肢反复短暂缺血预处理的动物模 型,通过与经典缺血预处理比较,探讨其是否能显示IPC效应,旨在为IPC的临床应用提供实验资料。
材料与方法
一、动物模型: 取体重250±30 g雄性SD大鼠,以20%乌拉坦(lg.kg-1ip)麻醉后固定于鼠台,分离两侧颈总动脉,备插心导管及采血用。分离气管,行气管插管,连接微型动物呼吸机行人工呼吸。将针形电极插入四肢皮下,连接心电图机,记录标准Ⅱ导联心电图。经左侧第四肋间开胸,剪开心包,暴露心脏及左室表面血管,以肺动脉圆锥及左心耳交界处的右冠状静脉为标志,用3/8 Cr3×6不锈钢圆针,3-0丝线穿过左冠状动脉前降支距左心耳下缘2 mm处,穿线后稳定15 min,取心电图正常者随机分4组,(1)正常对照组(normal controlgroup,NC),n=8,不结扎观察50 min; (2)缺血再灌组(ischemia-reperfusion group,I/R)n=12,以0.8 cm×0.3 cm乳胶橡胶片垫底,活结结扎冠脉30 min,再灌注20、180 min。冠脉断流及再通成功与否依心电图Ⅱ导联ST段抬高及恢复为准;(3)经典缺血预处理组(classical ischemic preconditioning group,C-IPC),n=12,按经典Murry法[5]复制,即结扎左冠脉前降支5 min,再灌注5 min,反复4次后,同I/R组一样处理;(4)非创伤性下肢缺血预处理组(non-wounded legs ischemic preconditioning group,N-WIPC),n=12,将大鼠固定于鼠台前,以止血带捆绑双下肢阻断血流5 min,松开5 min反复4次,每次捆绑以观双下肢变紫,捆绑下方腹沟处摸不到动脉跳动为准。以后处理同I/R组。 二、观察指标: (1)心肌梗塞面积(infarct size, IS):各组4只动物(除NC组)于再灌注180 min后,将左冠脉前降支原位重新结扎,从舌静脉注入0.05%伊文氏兰,待缺血区显示清晰后(未兰染),立即摘除心脏,冰冷生理盐水冲洗后留左室,-20℃左右冷冻10 min,作垂直于左室长轴连续环切,每片厚约2~3 mm,以TTC法染色,用IBAS全自动处理系统计算各部面积。以各片缺血区面积之和占各片左室壁面积之和的百分比作为缺血区范围(ischemic zone,IZ);以各片坏死区面积之和与各片左室壁面积之和的百分比作为坏死区范围(necrosing zone NZ);以NZ占IZ的百分比反映IS。 (2)左室功能测定:于再灌注20 min从大鼠右颈总动脉插入PE-50软质塑料导管,在ST-42型多导生理记录仪屏幕观察下进入左心室。同时,经压力换能器将左室压力信号输入生理记录仪,稳定5 min后,同步记录心电图Ⅱ导,左室内压(LVSP)、左室内压上升及下降最大速率(±dp/dt max),取5个记录波形的平均值。
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