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抗 2GPI抗体与抗磷脂抗体综合征的相关性研究 |
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AGE法测定纯度及分子量。
1.3.2 aβ2GPI ELISA法的确立 参照常规的ACA测定方法［3］，用含10 μg/ml β2GPI的pH 7.2 PBS 100 μl包被96孔板，4℃过夜。常法洗涤后用1％BSA封闭2 h。洗涤后加1∶50稀释的待测血清100 μl，37℃作用后洗涤。再加入羊抗人IgG-HRP(1∶800)，37℃孵育0.5 h，洗涤后加底物(OPD-H2O2)溶液，避光显色20 min,2 mol/L H2SO4终止反应，492 nm测吸光度（A）值。
1.3.3 数据处理方法及阳性标准 采用t检验；正常对照组均值加3倍标准差(x+3s)为正常上限。
2 结果
2.1 β2GPI的纯度及分子量 β2GPI经SDS-PAGE鉴定为一条带，与牛津大学标准品位置一致，分子量为46 kD，见图1。
图1 纯化β2GPI的SDS-PAGE图谱
Fig.1 SDS-PAGE of purified β2GPI
Note：lane 1. low molecular weight protein marker; lane 2. standard β2GPI; lane 3. purified β2GPI
2.2 αβ2GPI的测定结果及阳性率 正常对照组均值为x＝0.732±0.048。以此为标准，SLE组αβ2GPI水平明显增高(P<0.001)。以0.732＋3×0.048为正常上限，SLE组阳性率为95%(57/60)。
3 讨论
1986年正式命名抗磷脂抗体综合征(APS)以来，国外学者对这种累及多器官的自身免疫性疾病进行的研究证实APS多伴有APLAs的异常，对大量临床资料的回顾性分析表明SLE患者的IgG型APLAs阳性率为6%～73%，平均为34%［4］。
十年多的研究中，临床上多采用测定ACA的ELISA法来进行APS的诊断，然而ACA测定的标准化问题一直困扰着人们［5］。虽然近年国外成立了一些ACA标准化实验室，但目前为止ACA测定的标准化问题仍未彻底解决,严重影响了APS的研究。
ACA检测方法的特异性和重复性都不甚满意，这其中一个很重要的原因是β2GPI的影响。自从1990年发现β2GPI是ACA与CL体外结合所必需的蛋白辅助因子以来［6，7］，ACA检测系统中采用的封闭液和包被液均含有小牛血清(其中含β2GPI)。这使得ACA检测系统中的抗原成分十分复杂，有单纯的CL、β2GPI、还有二者形成的复合物，而且其中β2GPI的量很难控制。测定的抗体也包含着多种复杂的成分：有直接针对CL的抗体，有针对二者复合物的抗体，还包含了αβ2GPI。我们认为，为进一步揭示β2GPI在APS中诱导抗体产生的机制，研究测定αβ2GPI与APS的关系是很有必要的。
目前国内有关APS的研究报道较少，有ACA检测试剂盒出品及少量的研究报道［8］。尚无有关αβ2GPI的测定及其与APS的关系的报道，本文采用自建的ELISA方法测定了SLE患者血清中的αβ2GPI水平，发现临床上具有典型症状的SLE患者中αβ2GPI水平明显升高，提示αβ2GPI与SLE等APS相关疾病具有很强的相关性，αβ2GPI很可能成为APS的标记分子。以x+3s为正常值上限，SLE病人血清中αβ2GPI阳性率高达95％，远远高于本课题组ACA检测的阳性率(待发表)。而且研究中发现与ACA的测定相比，αβ2GPI测定的重复性更好，特异性更高(待发表)。这些结果进一步提示αβ2GPI与APS的相关性很可能比ACA更密切，αβ2GPI很可能会成为SLE等APS相关疾病诊断和研究分析的重要的实验室指标。鉴于β2GPI在APS中诱导抗体产生的过程中起重要的作用以及αβ2GPI与APS的相关性比ACA更为密切，我们推测αβ2GPI很可能在APS的病理过程中起着某种关键性的作上一页 [1] [2] [3] 下一页
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