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人 型免疫缺陷病毒gag基因在大肠杆菌中的表达 |
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田 梅① 金宁一 王秀清② 郭志儒 李体远 李宗株 方厚华 范洪学① 殷 震
摘 要 目的：表达HIV-2型基因工程gag抗原。方法：将编码HIV-2型gag的部分和全部p55gag1/2基因，克隆到载体pET-17b后，分别在E.Coli BL21(DE3)中表达。结果：表达产物为51和61 kD融合蛋白，并可与HIV-2病人血清发生特异性反应。表达量分别为菌体总蛋白的12.2%和6.2%。结论：上述两种gag重组蛋白可在E.Coli中得到表达，且有良好的抗原性。
关键词 人Ⅱ型免疫缺陷病毒 gag基因 大肠杆菌 表达
中国图书分类号 Q78
Expression of the HIV-2 gag gene in E.coli
TIAN Mei①,JIN Ning-Yi,WANG Xiu-Qing et al.
Changchun University of Agriculture and Animal Sciences,Changchun 130062. Prevention Medical Institute, Norman Bethune University of Medical,Changchun 130021
Abstract Objective:To express HIV-2 gag protein in E.coli.Methods:Insert the entire and truncated gag gene into the expressing vector pET-17b respectively,then transform and culture E.coli BL21(DE3).Results:Expressed fusion proteins of 51,61 kD could be recognized by serum from HIV-2 infected patients. They occupied 12.2% and 6.2% of the expressing host s total proteins respectively.Conclusion:The HIV-2 gag recombinant protein could be expressed in E.coli. The expressed gag protein has perfect antigenicity.
Key words Human immunodeficiency virus type Ⅱ gag gene E.coli Expresion
艾滋病是目前对全球健康威胁最大的一种病毒病，引起艾滋病的主要病原为HIV-1和HIV-2。HIV-2与HIV-1相比，具有潜伏期长、病情较轻、存活时间长的特点，在HIV-2的高发地区，HIV-1的感染率大大降低［1］。但对HIV-2尚没有特异的诊断方法。HIV-2核心蛋白(gag，group antigen gene)基因产物为未经拼接的mRNA翻译的55 kD的gag蛋白前体［1，2］，裂解为成熟的病毒粒子p16、p26和p12,HIV-2 gag蛋白含有大量的高度保守的功能区。许多研究结果表明，在HIV-2gag基因中发现了HIV-2的特异性CTL反应抗原决定簇［1，3］，可与感染者淋巴细胞发生CTL反应，感染早期，诱导机体产生高水平的中和抗体。可作为艾滋病早期诊断的指标。
本文利用高效表达载体pET-17b在大肠杆菌中表达了gag基因产物，为进一步制备抗gag抗体及早期诊断抗原奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株与质粒 E.coli HB101.BL21(DE3)均由本室保存。质粒pCRTMII-TAgag1(含1.282 kb的部分p55gag基因)和pCRTMII-TAgag2(含1.56 kb的全部p55gag基因,包括280 bp的gag:pol重叠区)。均由本室金宁一博士保存，中间载体pBluescript KS(-)和表达载体pET-17b(3.3 kb含T7噬菌体启动子)购自Novagen公司。
1.1.2 工具酶和生化试剂 限制性内切酶和其它工具酶及主要试剂均购自华美生物工程公司和美国Sigma公司产品，HIV-2感染者全血清由北京高达生物技术研究所提供。
1.2 方法
1.2.1 一般方法 [1] [2] 下一页
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