|
单个核细胞促血浆凝固活性监测急性排斥反应的实验研究 |
| |
是急性排斥反应(AGR)，选择非创伤性的免疫检测指标及早期预测AGR一直是人们关注的热点。在AGR的早期，受者的淋巴细胞与移植物表面的异己抗原相遇后，T淋巴细胞受到该抗原刺激而被激活。激活的T淋巴细胞诱导单核巨噬细胞产生凝血激酶样物质或称细胞相关因子，它是一种膜脂蛋白，能激活凝血系统,表现PCA活性［1］。
本文拟以同种异体皮肤移植的新西兰白兔(New Zealand white rabbits,NZW)作为检测对象，进一步观察发生AGR前后的免疫反应过程中外周血单个核细胞PCA水平的动态变化规律，以探讨PCA作为急性排斥反应检测指标的可能性。
1 材料与方法
1.1 实验动物 皮肤移植受者：NZW，雌雄不限，青壮年兔，19只。皮肤移植皮片供者：青紫兰灰兔,2只。正常兔血浆供者：NZW，雌雄不限,青壮年兔，6只。以上所用27只兔均购自中国药品生物制品检定所实验动物繁育场，于一级动物室喂养。无关抗原供者：大鼠，1只，约250 g，Wistar系，由本所动物室提供。
1.2 皮肤移植手术及药物处理 麻醉：氯胺酮44 mg/kg， 腹腔注射。皮肤移植［2］：自体皮肤移植：剪下8只白兔3 cm×3 cm全层皮片分别作原位移植，为第1组。同种异体皮肤移植：将灰兔皮肤3 cm×3 cm大小分别移植在11只白兔背部皮床，其中8只不给免疫抑制药为第2组，3只于术前1 d至术后7 d 每天皮下注射环孢霉素A 5 mg/(kg.d)为第3组。
1.3 检查方法
1.3.1 肉眼观察及照相 移植后每天早晚各观察皮片1次并摄像记录。移植皮片存活的表现：粉红色、皮薄、质柔软；发生AGR时皮片的表现：皮片变硬、点状或片状发黑［3］。观察同时照相。
1.3.2 移植皮片病理标本检查 移植后隔日取全层皮片少许置于10%福尔马林中固定，待做普通病理检查。
1.3.3 PCA的测定操作 实验用的血浆制备和PCA测定参照武建国的方法［4］。单个核细胞悬液制备：移植术当天及术后1、3、5、7、9、11、13 d取移植受者NZW耳缘静脉血各2 ml分离单个核细胞，加RPMI 1640，制成1×107 ml-1细胞悬液［4］。供体抗原的制备：用供体耳静脉血，分离MNC制备出供体抗原。大鼠抗原的制备：以大鼠脾脏MNC制备大鼠抗原（RAg）。MNC的处理：1×107 ml-1MNC悬液加于微孔培养板孔内，每只动物的MNC分装8孔，分为4组（a 、b 、c 、d），每组2孔。a组细胞即刻测PCA；b组细胞孔内加RPMI 1640；c组细胞孔内加供体抗原；d组细胞孔内加大鼠抗原，b 、 c 、d 3组细胞置37℃水浴温育2 h。PCA测定：a 、b 、c 、d 各组细胞1 000 r/min，离心20 min，弃尽上清后，分别加混合血浆和CaCl2，立即记时，记录血浆凝固时间（以秒为单位）。各组的血浆凝固时间分别以a 、 b 、 c 、 d表示。血浆复钙时间（A）测定：混合血浆加CaCl2后，立即记时，记录血浆凝固时间［4］。
1.3.4 PCA百分率计算方法 自然PCA（Spontaneous PCA, SPCA）
1.4 激活淋巴细胞百分率（Actlym%）测定 MNC悬液制备完成后立即涂片，显微镜下观察计数淋巴细胞率。
1.5 统计学处理 各组动物各时间段的SPCA%及Actlym%、DAgPCA%、RAgPCA%等测值及出现AGR时间以均值±标准差表示,SPCA与CPCA和SPCA与Actlym作直线相关和直线回归分析。
2 结果
2.1 移植皮片生长情况 确定AGR的肉眼观察指标是移植皮片变硬及出现黑点。自体皮片移植组,皮片生长良好,8 d伤口痊愈,皮片颜色和硬度始终正常,未出现AGR；同种异体移植皮片发生AGR的时间:未给CsA的第2组为(7.75±0.71) d，给CsA的第3组为(11.67±0.58) d。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 抗子宫内膜抗体和子宫内膜异位症
下一个医学论文： 单克隆抗体3D3重链可变区基因结构分析
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文