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抗子宫内膜抗体和子宫内膜异位症 |
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mdash;抗子宫内膜抗体（EmAb)［1］，因而临床上将EmAb检测作为内异症的辅助诊断指标及疗效（手术、药物）考核指标。我们采用改良法提取、纯化子宫内膜抗原（EmAg)，并分析了正常人和内异症患者EmAg的抗原特异性、氨基酸组成及含量，在此基础上建立了EmAg检测的ELISA方法，以研究、探讨EmAg、EmAb与内异症的关系。
1 材料与方法
1.1 子宫内膜抗原的提取、纯化 经我们改良，将（9份）正常人和（14份）异位的子宫内膜（病理检查确诊）经 I型胶原酶（collagenase，300 U/mg Sigma产品，终浓度为0.1%）消化、Sephadex G-100 分离，再经抗正常人血清-亲和层析纯化［2］。
1.2 正常人与异位的子宫内膜抗原纯度及特异性分析 取纯化的EmAg与异位的EmAg经不连续SDS-PAGE，再按文献［3］进行Western blot。
1.3 正常人与异位的子宫内膜抗原氨基酸分析 由上海第二医科大学测试中心采用LKB4151型氨基酸分析仪分析、测定其氨基酸成分及含量。
1.4 抗子宫内膜抗体的ELISA间接测定法的建立及方法考核 将分离、纯化的EmAg包被聚苯乙烯板（浙江黄岩拱东塑料厂），用1% BSA封闭、干燥、4℃保存。检测时洗3次，加入对照血清及标本（1∶50稀释）0.1 ml/孔，37℃、反应60 min；洗3次，加酶标抗体应用液0.1 ml/孔，37℃、反应60 min；洗4次，加底物溶液（OPD）0.1 ml/孔，反应30 min；最后于各孔中加入50 μl 2 mol/L H2SO4终止反应，在酶标仪（Sigma 960）上测定各孔的A490 nm值，计算结果，并对方法稳定性、精密度进行常规考核。
1.5 结果判断 将正常人血清、内异症患者血清测定的A490 nm值进行统计处理，t检验证实两者有显著差异（P<0.05)，即以上述正常人混合血清作为阴性对照，凡检测标本A490 nm值与之比值（P/N）>1.3即判为阳性。
2 结果
2.1 子宫内膜抗原的纯化 用胶原酶消化的粗制EmAg经Sephadex G-100分离，得到3个蛋白洗脱峰，蛋白质主要集中在第一洗脱峰，随后经ELISA分析，抗原特异性亦主要集中在第一洗脱峰，收集、浓缩后，再经抗正常人血清-亲和层析分离、纯化，得纯化的EmAg，以此作为实验用EmAg。
2.2 子宫内膜抗原SDS-PAGE及Western blot分析 纯化的EmAg经不连续SDS-PAGE，结果见图1，正常人EmAg有2条蛋白条带：48.0 kD和大于97.4 kD;子宫内膜异位症患者的EmAg则有3条蛋白条带：46.0、54.0和大于97.4 kD。随后的Western blot分析表明，正常人EmAg中仅大于97.4 kD的蛋白带可与EmAb 发生特异性反应，而异位的EmAg 3条蛋白带均可与EmAb发生特异性反应。
图1 子宫内膜抗原SDS-PAGE分析
Fig. SDS-PAGE analysis of antiendometrial antigen
Note：1. Standard marker；2. Normal human；3. Endometriosis
2.3 正常人与异位的子宫内膜抗原氨基酸成分分析 正常人EmAg由15种氨基酸组成，而异位的EmAg则由16种氨基酸组成，且两者在各氨基酸含量上亦有差别，结果见表1。
表1 正常人与异位的子宫内膜抗原氨基酸及含量比较
Tab. 1 Analysis of amino acids and contents in endometrial antigen between the normal human and the patients with endometrimosis
amino acid (nmol) contents
normal endometriosis
aspartic acid（D） 25.42 35.86
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