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p53基因突变与食管癌生物学行为的关系 |
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sion The data suggest thatthere is a strong correlation between the presence of p53 mutation
and thebiological behavior of human esophageal cancer, such as histologic differentiation,invasion stage,
and regional lymph nodes metastasis. Detection of p53 mutationcan be helpful in identifying more progressive
esophageal cancer and assessingprognosis. The study also discussed the dominant negative effect of p53 and
the genetic effect of silent mutation
【Key words】 Esophageal cancer p53 gene Mutation Biological behavior
食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率占全国肿瘤死亡率的第2位。国内
外研究已证实p53基因异常与食管癌的发生有关［1，2］，但该基因突变与食管癌生物学
行为的关系尚待深入研究。我们应用PCR-SSCP结合银染DNA序列测定技术对30例散发性
食管癌及其相应正常组织中p53基因第5～8外显子进行了突变检测，重点探讨了p53基因
变异与食管癌的分化程度、浸润程度及淋巴结转移等生物学行为指标的相关性。以期为
食管癌的预后判断，治疗方案选择提供更为有效和客观的分子生物学指标。
1 材料和方法
1.1 病例采集和DNA制备 30例食管癌患者的癌组织及癌旁正常组织均取自外科手术切除
标本，分别由南京铁道医学院附属医院病理科和江苏肿瘤医院病理科提供并鉴定。所有
标本采用常规酚氯仿法提取基因组DNA。
1.2 PCR-SSCP银染法 合成3对PCR引物(中科院上海细胞生物学研究所)，分别扩增p53基
因第5～6、第7、8外显子(表1)。PCR反应体系含基因组DNA0.2μg，上、下游引物各25pmol、
dNTPs80μmol／L，TaqDNA聚合酶1.5～2U，总反应体积50μl。PCR扩增条件为：94℃、
30秒，58℃、30秒，72℃、60秒，循环30次，最后72℃延伸5分钟。取PCR产物变性后，
经6%～8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳3～6小时，银染显色分西。
表1 PCR扩增所用的3对引物
Tab 1 Primer sequences for PCR
Exon
(外显子) Primer name
(引物) Primer sequences
(引物序列) Size(bp)
(片段长度)
5-6 p5-6F 5′GGAATTCCTCTTCCTGCAGTACTCC 416
p5-6R 5′GGAATTCAGTTGCAAACCAGACCTCA
7 p7F 5′GGCCTCATCTTGGGCCTGTG 171
p7R 5′CAGTGTGCAGGGTGGCAAGT
8 p8F 5′GGACAGGTAGGACCTGATTTC 240
p8R 5′AATCTGAGGCATAACTGCA
1.3 PCR产物直接银染测序法 PCR产物经低熔点凝胶和WizardTMPCR纯化系统(Promega
产品)回收纯化后，按Silver SequenceTM测序试剂盒(Promega)说明，分别以p5—6F、
p5—6R、p7F、p8F作为引物进行测序反应。反应产物变性后，6%变性聚丙烯酰胺凝胶
电泳2～3小时，恒功率60W。电泳结束将附着在短玻璃板上的测序胶按试剂盒的银染操
作说明显色后置于X光读片灯上直接读序。
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