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凝血因子 B亚单位遗传多态性在中国七个群体的分布 |
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elefrequencies of FⅩⅢB
differentiated the populations in the world into the main ethnic groups as what other authors reported.
Conclusion FⅩⅢB is a useful genetic marker for population genetics and forensic haemogenetics.
【Key words】 Coagulation factor FⅩⅢB subunit gene Genetic polymorphisms Isoelectric
focusing
凝血因子ⅩⅢ(coagulation factor ⅩⅢ，简称FⅩⅢ)是凝血因子中一种对止血及纤溶
具重要作用的酶(EC2.3，2，2.13)，又称纤维蛋白转谷氨酰胺酶，纤维蛋白稳定因子。
血浆中，FⅩⅢ由2种不同多肽亚单位构成(分别称为A和B)。A亚单位具转谷氨酰胺酶活
性，B亚单位为A亚单位的血浆载体分子。1979年Board 最先利用电泳技术在澳大利亚
群体中显露了A、B亚单位各自独立的遗传性多态性。有关B亚单位(FⅩⅢB)的群体遗传
数据大多局限在欧洲、日本、美国等地人群中［1，2］。国内张林等曾对成都地区汉族
人群的FⅩⅢB多态性进行了研究［3］，观察到3个常见的等位基因，频率均达到多态性
水平。现存在的问题是：中国群体FⅩⅢB的研究仅局限于一个地区的人群，而其他地
区的人群，特别是在地理环境差异很大的北方、南方以及世界屋嵴的西藏是否存在相
同的情况，尚有待研究，FⅩⅢB作为遗传多态性标记在中国人群中的群体遗传价值也
有待评估。
我们采用等聚焦及免疫印迹技术，将FⅩⅢB的多态性研究扩展到广州汉族，吉林
汉族，西藏藏族，云南白族，新疆维吾尔族，内蒙古蒙古族，广西壮族共7个群体，以
期对我国人群FⅩⅢB基因频率分布有一个概括性的了解，并且对其在群体遗传学和法
医血液学中的应用价值进行评估。
1 材料与方法
1.1 样本 819份血样本分别采自广州汉族、吉林汉族、西藏藏族、云南白族、广西壮
族、新疆维吾尔族、内蒙古蒙古族无亲缘关系的献血者(表1，3)。EDTA抗凝，离心分
离血浆，贮存于-20℃备用，所有血样本在电泳前均用唾液酸苷酶处理。
1.2 仪器与试剂 MultiphorⅡ型多功能电泳系统(LKB，瑞典)；唾液酸苷酶V型(Sigma，
美国)；pharmalyte pH5～8，pH4～6.5(Pharmacia,瑞典)；兔抗人FⅩⅢB血清(Behring werke
AG,Marburg,德国)；辣根过氧化物酶标记羊抗兔Ig(Sigma,美国)；DAB(Fluke，美国)；
丙烯酰胺及双丙烯酰胺(LKB，瑞典)，其余试剂为国产分析纯级。
1.3 FⅩⅢB表型测定方法 等电聚焦：薄层聚丙烯酰胺凝胶(T＝3.9%，C＝2.6%)，载体
两性电解质含量为2.8%，pH范围4～8，2种pharmalyte各占一半，循环水温为10℃，阳
极液为0.05mol／L H3PO4，阴极液为0.05mol／L NaOH，电极间距10cm，预聚焦30分钟
后，将唾液酸苷酶处理后的血浆加在距阳极1cm的凝胶表面，上样量为5μl／样本，总
聚焦8 500伏特小时。免疫印迹：等电聚焦结束后将凝胶中的蛋白质被动转移至硝酸纤
维素薄膜30分钟，用3%牛血清白蛋白封闭，酶免疫分析间接法检测膜上的FⅩⅢB蛋白带。
第1抗体为400倍稀释的兔抗人FⅩⅢB抗体，第2抗体为400稀释的酶标羊抗免疫球蛋白
抗体，底物为DAB［3］。
1.4 数据处理 用基因计数法计算基因频率，Hardy-Weinberg平衡吻合度检验及群体
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