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东北地区正常人群St14 DXS52 位点VNTR多态分布及在甲型血友病基因诊断中的应用 |
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eaction Hemophilia AGene
diagnosis
数目可变的串联重复序列(variable number of tandem repeat, VNTR)是人类基因
组中常见的一种多态标记，其应用十分广泛［1］。St14位点位于Xq28，内含VNTR多态序
列，与甲型血友病FⅧ基因紧密连锁，两者相距2cM，因而以此为遗传标记可进行甲型血
友病的基因诊断［2］。目前国内尚未见到对St14(DXS52)位点VNTR多态在中国人中的分
布及其在甲型血友病基因诊断中的应用报道。为此，我们应用PCR扩增技术，检测并分
析了东北地区正常汉族人群的St14(DXS52)位点VNTR多态分布情况，并以此为遗传标记
对3个甲型血友病家系进行连锁分析，完成了产前基因诊断。
1 材料与方法
1.1 材料 东北地区正常汉族人血样60例，其中男12例，女48例；3个有家族史的甲型血
友病家系(由中国医科大学附属第二院儿科血清学诊断并提供)有关成 员外周血及孕妇羊
水(妊娠18～20周穿刺采取)。
1.2 方法 常规酚／氯仿法提取血液白细胞DNA，煮沸法［3］提取羊水脱落细胞DNA。PCR
反应总体积为20μl，含基因组DNA0.1μg，引物至0.5μmol／L，dNTP至100μmol／L，
10mmol／L Tris-HCl，50mmol／L KCl，1.5mmol／L MgCl2，0.01%gelatin， Taq DNA
聚合酶1U(安普公司)。引物序列为5′-GGCATGTCATCACTTCTCTCATGTT-3′及
5′-CACCACTGCCCTCACGTCACTT-3′。反应条件为94℃ 1分钟，60℃30秒，72℃2分钟，
30周期循环后，72℃延伸7分钟(PE公司9600型PCR仪)。扩增产物以Horii Marker(日本
国大阪大学细胞工程中心Horii先生自制的能检测0.6～3.6kb之间不同大小片段的分子
量标准物)为对照，1%琼脂糖凝胶电泳后，溴化乙锭染色，观察结果。
2 结果
2.1 东北地区正常汉族人群St14(DXS52)位点VNTR多态分布 检测来自东北地区遗传上无
相关的正常汉族个体60人，其中男12人，女48人，总计108条X染色体中共检出8种等位
基因片段，最短片段为0.7kb(A)，依次为1.3(B)，1.39(C)，1.57(D)，1.63(E)，1.69(F)，
2.1(G)，2.4kb(H)等不同长度的等位基因片段(图1)，其等位基因频率为A 0.38，B 0.04
6，C 0.083，D 0.232， E 0.111， F 0.130， G 0.009， H 0.009等详见附表。根据如
上检测结果计算其多态信
图1 St-14(DXS52)位点VNTR等位基因片段(图中可见6个等位基因片段)
Fig 1 Allele fragments of St14(DXS52)VNTR (6 allele fragments in photo)
附表 东北地区正常汉族人群St14(DXS52)位点VNTR多态分布情况
Tab 1 Polymorphism distribution of St14(DXS52) VNTR in normal Han population
in north-easternregion of China
Amplification
fragment length(bp)
(扩增片段长度) Number of
chromosone X
(X染色体数) Allele frequence
(等位基因频率) PIC
(多态信息量)
700(A) 41 0.380
1300(B) 5 0.046
1390(C) 9 0.083
1570(D) 25 0.232 76.36%
1630(E) 12 0.111
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