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遗传性非息肉病性大肠癌基因研究进展 |
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g，EST)又鉴定3个与酵母mut L极其相似的基因。其中与mut L最相似的被
命名为hMLH1，另两个被分别命名为hPMS1和hPMS2。体细胞杂交将它们分别定位于3、
2、7号染色体上。由于位于3p21的标志先前已发现与HNPCC相关，所以hMLH1引起人们
的极大兴趣，进而用基因组DNA与人类染色体进行荧光原位杂交，结合复染，将hMLH1
定位于3p21.3区段上［13，14］。
研究者们起初认为HNPCC基因与其它几个结肠癌相关基因如APC、p53一样，是经
典的肿瘤抑制基因。后者在肿瘤发生过程中至少要丢失两个拷贝的其中一个，但de
la Chapella、Vogelstein研究组用2号染色体标志在家族成员的癌标本中并未鉴定出
缺失，而代之以2号染色体标志点的微卫星DNA长度的改变，进而他们在几乎所有分析
过的家族性肿瘤中均看到了类似的改变。以上工作表明，由于2号染色体上的基因改
变，导致结肠癌细胞中的DNA在整体上没有被精确地复制。这一结果使他们想到了原
核生物的mutS及mutL基因。后二者是错配修复基因，其产物参与识别、校正错配碱基
对mutS和mut L的失活，导致了遍布整个基因组的微卫星序列的改变。经PCR扩增与克
隆分析，发现了人类具有与原核生物mutS、mutL的极其相似的同源序列，即hMSH2和
hMLH1，此二基因是人类的错配修复基因，负责人DNA复制的精确性。
3 hMSH2、hMLH1基因结构
为了确定定位于2p15上的hMSH2的基因序列，Fredrick S. Leach等用PNP-23的插
入片段筛选了用人类结肠癌细胞或胎儿脑组织构建的cDNA文库。用探针杂交法及cDNA
步移法(cDNA Walk)共鉴定出147个cDNA克隆，经过对这些克隆的综合分析，得出了hMSH2
的cDNA序列，其开放的读码框架起始于cDNA5′末端下游的69nt处， 共有2 802bp。
起始这一开放的读码框架的蛋氨酸处于能进行有效翻译的适当位置，读框内具有一个
终止信号［11］。Stefan J用PCR法筛选了人P1基因库，分离出hMSH2的起动子区，并对
P1重组DNA直接测定，分析了hMSH2起动子1 100bp特点。起动子序列包含了许多蛋白结
合位点，但未发现常见的TATA和CAAT box，这种结构是多数管家基因起动子的典型结构。
如Bert Vogelstein所说，hMSH2和hMLH1是所有管家基因的母基因［15］。hMLH1的cDNA
序列亦经类似的方法获得，其开放的读码框架开始于cDNA5′末端下游的第42位核苷酸，
共2 268个bp。读框内有适于有效翻译的起始蛋氨酸和终止信号，且hMLH1与mut L的读
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