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生后大鼠颌下腺5 |
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王 炜 黄威权 吕坤聚 銶新宇
(第四军医大学组织学胚胎学教研室，西安 710032；
**解放军 401 医院病理科，青岛)
摘 要 为研究大鼠颌下腺5-羟色胺及其受体的相对含量与日龄的关系，用免疫组织化学法结合原位定量，测定了大鼠颌下腺5-羟色胺及其受体免疫反应产物的相对含量。结果发现，大鼠颌下腺5-羟色胺及其受体的相对含量在生后1～60日龄内随日龄的增长而增多，在60～90日龄内基本保持恒定。这提示大鼠颌下腺的5-羟色胺及其受体含量可能与其发育成熟有关。
关键词 5-羟色胺 5-羟色胺受体 颌下腺 原位定量 免疫组织化学
随着研究的不断深入，人们发现颌下腺不仅能产生消化液，还可合成和分泌多种生物活性物质，这些生物活性物质在颌下腺中的含量与动物年龄有一定关系［1］。我们先前的实验已确立了5-羟色胺在颌下腺的正常分布，而且与5-羟色胺受体有共存关系［2］。本实验采用免疫组织化学ABC法结合原位定量测定，探讨了颌下腺内5-羟色胺及其受体的相对含量与动物日龄之间的关系，为颌下腺的功能提供新的依据。
材料和方法
1. 试剂
兔抗5-羟色胺多克隆抗体［3］及5-羟色胺β型抗独特型多克隆抗体［4］均为本室自产，ABC药盒购自武汉博士德生物制品公司。
2. 动物及标本制作
正常雄性SD大鼠30只，分为6组，每组5只。第1组为1日龄，第2组为5日龄，第3组为12日龄，第4组为30日龄，第5组为60日龄，第6组为90日龄。上述大鼠经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，右心房放血处死，取其左侧颌下腺，按常规石蜡切片的制作程序制成2μm厚的石蜡切片，贴在涂有铬矾明胶的载玻片上，置于37℃烤箱24h备用。
3. 免疫组织化学反应程序
石蜡切片经脱蜡水化后入PBS(pH7.4)，经甲醇-H2O2孵育20min，除去内源性过氧化物酶。按免疫组织化学ABC法进行染色。兔抗5-羟色胺多克隆抗体及其β型抗独特型多克隆抗体的稀释度分别为1∶2 000和1∶400，在4℃冰箱内孵育时间均为24h。生物素标记的羊抗兔IgG抗体的稀释度为1∶200，ABC复合物的稀释度为1∶100，在室温孵育时间分别为1h和30min，DAB-H2O2显色，镜下控制背景。分别用正常兔血清和PBS代替第一抗体孵育作为对照。
4. 原位定量测定法
用MPV Ⅱ型细胞显微分光光度计对各组动物标本的5-羟色胺及其受体免疫反应产物的相对含量进行测定。每例随机测10个单位面积(相当于1个细胞的面积)，每组测50个单位面积，计算出每个单位面积的5-羟色胺及其受体的相对含量，然后进行t检验统计学处理。
结果与讨论
1. 不同日龄组大鼠颌下腺内5-羟色胺的分布及其相对含量的变化
生后1d到5d，大鼠颌下腺内5-羟色胺免疫反应细胞仅见于分泌管和小叶内导管的上皮细胞(图1)，生后12d阳性细胞开始在浆液性腺泡上皮细胞出现，生后30d阳性细胞数明显增多(图2)，生后60d阳性细胞数进一步增加(图3)，生后90d阳性细胞的分布与生后60d相仿，无明显变化。同时，不同日龄组5-羟色胺免疫反应性产物的相对含量也不相同，见表1。60日龄内的大鼠颌下腺5-羟色胺的相对含量随日龄的增长而增加，其中从1日龄组到5日龄组，5-羟色胺的相对含量增加较慢，这两组间无显著性差异(P＞0.05)，从5日龄组到60日龄组其相对含量增加较快，相邻两个日龄组间5-羟色胺的含量差异非常显著(P＜0.01)，60日龄后5-羟色胺的相对含量基本恒定，与90日龄组者相比，无显著差异(P＞0.05)。
表1 5-羟色胺在不同日龄大鼠颌下腺相对含量
Table 1 The relative contents of 5-HTin submaxillary glands of different day age rats
动物分组
groups 相对含量／单位面积(±S)
relative amount/unit area t值
t P值
P
1d 0.0266±0.0082 － －
5d 0.0275±0.0049 0.0730 ＞0.05
12d 0.0513&pl[1] [2] 下一页
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