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生后小鼠颌下腺神经生长因子基因表达的发育变化 |
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> 应用AST 386-25和PCVISION PLUS图像处理卡(美国Imaging技术公司)组成的图像处理系统，通过Olympus BP-2显微镜放大400倍摄取图像，输入图像分析系统。每张切片抽取10个视野，分别测量不同年龄小鼠颌下腺纹状管和颗粒曲管的直径、面积以及原位杂交阳性信号的灰度值(定义为灰度值越小，阳性反应越强)。调节电压、光圈，使各切片在相同条件下测量。结果以Kewman-Kleuls法进行统计学分析。
结 果
在ICR小鼠颌下腺内，dig-h NGFβDNA探针与其互补的mRNA杂交信号主要分布在纹状管和颗粒曲管的上皮细胞，呈蓝色或紫蓝色颗粒，位于细胞的胞浆中。新生小鼠颌下腺管道系统较细，部分呈闭合状态，未见NGF杂交信号(图1)。8～10d龄小鼠颌下腺纹状管细长，分支较少，NGF原位杂交信号呈阴性或弱阳性(图2)。12～14d小鼠颌下腺的纹状管NGF原位杂交信号均呈弱阳性，大部分分布于细胞基底部，小部分位于近腔面胞质中(图3)。1月龄小鼠颌下腺纹状管管径明显发育增粗，分支增多，部分纹状管管径扩大转变成颗粒曲管。纹状管和颗粒曲管NGF原位杂交信号明显增强，位于细胞核周围胞浆中(图4，5)。2月龄小鼠大部分纹状管进一步增粗、弯曲，发育成颗粒曲管，在同一视野可看到许多粗大而分支的管腔，颗粒曲管上皮细胞呈高柱状，境界清楚，细胞核位于细胞的下1/3。NGF原位杂交信号更强，主要集中在上皮细胞下半部胞浆内(图6，7)。颗粒曲管上皮细胞原位杂交信号的强度不尽相同，有些很强，有些较弱，未加dig-h NGFβDNA探针和以无关DNA探针代替NGF DNA探针的对照组颌下腺切片均无杂交信号(图8，9)。
图像分析结果显示，雄性小鼠颌下腺导管的直径及面积在生长发育过程中增长较快，尤其是在出生2周后成倍增长，2月龄小鼠颗粒曲管的面积比12～14d小鼠纹状管的面积增大8倍左右，较1月龄小鼠增大3倍左右。dig-h NGFβDNA探针原位杂交信号的灰度值在12～14d龄小鼠和新生小鼠之间出现明显差异(P＜0.05)，此后灰度值持续减少，12～14d龄小鼠与1月龄小鼠以及1月龄小鼠与2月龄小鼠之间均存在明显差异(附表)。
附表 小鼠颌下腺生长发育阶段分泌导管图像分析参数(±s)
Table Morphometry analysis of submandibular gland secretory duct of
mice during postnatal development
组别
groups 视野数(个)
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