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多因素所致温病湿热证模型大鼠红细胞免疫功能的变化 |
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1 材料与方法
1.1 动物 Wistar大鼠，雌雄兼用，体重180～220 g，清洁级，由华南实验动物中心提供。
1.2 试剂及菌种 致敏及未致敏冻干酵母菌制剂购自上海第二军医大学长海医院免疫室。大肠杆菌(E.coli. 44851)，中国生物制品检验所提供，应用浓度为107ml-1；鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella tyhimupium 460894),中国军事医学科学院提供，应用浓度为109 ml-1。
1.3 造模箱 本课题组自行设计后，由第一军医大学医疗器械修配所制造，型号Z-1型，自动调温调湿。
1.4 实验分组 模型1组，(高脂高糖+造模箱+鼠伤寒沙门氏菌)大鼠饲以高糖高脂饲料，10 d后，放入造模箱(温度35℃、相对湿度95%，下同)，96 h后，灌胃给予鼠伤寒沙门氏菌2 ml/200 g体重。120 h后，再加强感染1次(1 ml/200 g体重)，然后将动物从造模箱移出，置自然环境；模型2组，(高脂高糖+造模箱+大肠杆菌)大鼠饲以高糖高脂饲料，10 d后，放入造模箱，72 h后，尾静脉注射大肠杆菌1 ml/200 g体重。3 d后，从造模箱移出；模型3组：(高脂高糖+造模箱)大鼠以高脂高糖饲料喂养10 d，然后放入造模箱中，3 d后从造模箱中移出；模型4组：(高脂高糖+人工气候室Artifical climate chamber， ACC)大鼠给以高脂高糖饲料喂养10 d，然后放入人工气候室(温度39℃逐渐升至42.5℃，相对温度70%)。4 h后，从人工气候室移出；模型对照1组：大鼠给以正常饲料10 d，然后放入人工气候室。4 h后，从人工气候室移出。以上各组动物均为从造模箱及人工气候室移出1 h内，采血进行检测。正常对照组：常规饮食及自然环境(温度22℃，相对湿度65%)。
1.5 实验方法 大鼠按上述分组分别施加各种因素，实验结束后，尾静脉采血，按郭峰方法测定红细胞C3b受体(Erythrocyte C3b receptor rosette, E-C3bR)及红细胞粘附免疫复合物(erythrocyte immune complex receptor rosette, E-ICR)［2］。大鼠尾静脉血0.2 ml，用生理盐水洗涤两次，调整红细胞数为1.2×1011L-1。取两支试管，各加红细胞悬液0.075 ml，第1管加致敏酵母多糖0.075 ml，第2管加未致敏酵母多糖0.075 ml，37℃水浴30 min后，加0.25%戊二醛0.05 ml，涂片，瑞士染色，高倍镜下计数200个红细胞，以1个红细胞结合2个或2个以上酵母细胞为1个花环，计算花环形成百分率。
2 结果
2.1 不同生物因子对大鼠红细胞免疫功能的影响 大鼠给予高脂高糖饲料并置于造模箱中，模型1组灌胃鼠伤寒沙门氏菌，模型2组静注大肠杆菌。实验结束后，测大鼠红细胞免疫功能。结果见表1。结果可见，在外界环境相同条件下，生物因子的作用对大鼠红细胞免疫功能具有显著的影响。两组感染生物因子模型大鼠红细胞C3b受体数显著降低，而红细胞粘附免疫复合物显著增高。模型对照组与正常对照组比较大鼠红细胞C3b受体数显著降低。
表1 不同的生物因子对大鼠红细胞免疫功能的影响(±s，%)
Tab.1 Effect of different biological factors on erythrocytoimmunity in rats (±s，%)
Group n E-C3bR E-ICR Effect factor
Normal control 10 21.37±6.52 17.75±6.26 Normal diet+natural enviroment
Model control 1 12 14.67±4.213) 15.5±10.64 Normal diet+model box
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