|
LPS对人胚胎胰岛分泌IL |
| |
IL-6是一种免疫调节因子，可由多种细胞产生，具有多种生物学功能。LPS是细菌脂多糖，作为一种丝裂原，有明显的非特异免疫刺激作用。1993年我们初步观察到人胚胎胰岛可自发分泌IL-6［1］，为了进一步观察人胚胎胰岛细胞在产生IL-6方面是否可以受免疫刺激剂LPS的调控，又直接观察了人胚胎胰岛细胞在受LPS刺激后，IL-6的分泌状况。
1 材料与方法
1.1 样本的采取和胰岛细胞的分离培养 实验所用标本为自然死亡2 h以内的早产胎儿。按常规方法，无菌取出胰腺，胰岛细胞的制备同文献［1］。
1.2 人胚胎胰岛细胞培养上清的制备 将胰岛细胞悬液调为5×105 ml-1，种入24孔板，加入LPS使其终浓度为10 mg/L，分不同时间收获上清，每次2孔，受LPS刺激后的胰岛，收上清后换取新鲜培养液，再加入LPS进行两次刺激，分不同时相收获上清，测定上清中IL-6、胰岛素和胰高血糖素的含量。
1.3 IL-6生物活性检测 IL-6生物活性检测按文献［1］进行。IL-6依赖细胞株MH60.BSF-2由日本大阪大学细胞工学中心惠赠。rhIL-6为本室产品，已用IL-6标准品(美国NIH产品)进行标定。
1.4 胰岛素和胰高血糖素测定 用北京原子能研究所提供的125I-胰岛素放射免疫分析药盒和胰高血糖素放射免疫测定盒测定。胰岛素的标定单位为mIU/ml，胰高血糖素的标定单位为pg/ml。
1.5 IL-6单克隆抗体中和活性测定 IL-6单抗为经实验证明与rhTNF、rhIFN、rhGM-CSF、rhG-CSF和rhIL-2均无交叉反应。用LPS刺激的胰岛培养上清，加入不同浓度的IL-6 McAb(0.85～12.50 μg/ml)，同时设rhIL-6 40 U/ml作为阳性对照。每个样品设3个平行孔，用MTT法测定中和活性，中和活性以中和百分数(%)表示。
1.6 胰岛细胞IL-6 RNA斑点杂交 IL-6cDNA探针(本室产品)的制备及标记，胰岛细胞RNA的提取及RNA斑点杂交均按文献［1］进行。
2 结果
2.1 LPS对原代培养的人胚胎胰岛分泌功能的影响 如图1A所示，人胚胎胰岛细胞受LPS刺激后，分泌IL-6的能力明显增加，在第8天达高峰，IL-6含量为对照组的145倍，连续培养10 d，仍具有很强的IL-6活性(3 656 mU/islet)。如图1B所示，LPS刺激组胰岛素的含量基本保持比较平稳的状态，与对照组相比，LPS组d4～9胰岛素含量均高于对照组，d10与对照组含量基本相同。如图1C所示，胰高血糖素的变化和IL-6、胰岛素相反，LPS刺激组胰高血糖素含量明显低于对照组，在d7～9含量升高，但仍低于对照组。
图1 LPS刺激后人胚胎胰岛IL-6、胰岛素、胰高血糖素分泌状况
Fig.1 Effects of primary culture with LPS on human fetal islets IL-6 production,insulin release and glucogon secretion
图2 LPS两次刺激后人胚胎IL-6、胰岛素、胰高血糖素分泌状况
Fig.2 Effects of second culture with LPS on human fetal islets IL-6 production,insulin release and glucogon secretion
2.2 两次LPS刺激对人胚胎胰岛分泌功能的影响 受LPS刺激后的胰岛细胞，进行两次LPS刺激。图2A所示，IL-6的分泌在对照组d1为最低，d5达高峰(47 mU/islet)。LPS组与对照组表现出相似的趋势，但含量明显高于对照组，在高峰期IL-6的含量为对照组高峰期的25倍。图2B所示，两次LPS刺激组胰岛素含量明显升高。在d2、d4和d7出现3次分泌高峰，两次LPS刺激胰岛素的含量升高的幅度明显高于一次LPS刺激。图2C所示，两次LPS刺激组胰高血糖的含量明显低于对照组。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 舒喘灵对缺氧大鼠肺动脉高压和肺组织肾上腺素能 2受体mRNA表达的影响
下一个医学论文： 微囊化猪胰岛对特异性抗体的免疫隔离作用的研究
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文