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拮抗内皮素生物学效应对甘油所致大鼠急性肾功能衰竭的影响 |
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制和对抗其生物学效应，可能对肾脏疾病的防治具有重要意义。本实验在甘油致大鼠急性肾功能衰竭(acute renal failure, ARF)模型上，观察了外源性ET的作用以及心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、硝苯吡啶(nifedipine, Nif)和左手性精氨酸L-arginine, L-Arg)对其生物学效应的影响。
材料与方法
一、模型复制及分组：
选用成年雄性Sprague-Dawley大鼠36只，体重200～250 g(河北省实验动物中心提供)。动物随机分为6组：(1)正常对照组(C)；(2)ARF组，按我们以往的方法复制ARF模型［3］，将动物置于18～22℃实验室饲养两日后，禁水16 h，肌肉注射50%甘油生理盐水10 mL/kg体重，于注甘油即刻尾静脉注射同给药组等量生理盐水作对照；(3)ARF+ET组，注甘油即刻尾静脉给予ET(250 ng/kg,注射容量0.2 mL/100 g体重)；(4)ARF+ET+ANP组，注甘油即刻尾静脉给予ET(剂量同上)和ANP(50 μg/kg,注射总容量为0.2 mL/100 g体重)；(5)ARF+ET+Nif组，注甘油后即刻尾静脉给予ET(剂量同上)和Nif(0.1 mg/kg，容量同上)；(6)ARF+ET+L-Arg组，注甘油后即刻尾静脉
河北省自然科学基金资助(No.395420)
给予ET(剂量同上)和L-Arg(100 mg/kg，容量同上)。ET、ANP和L-Arg用生理盐水配制，Nif用聚乙二醇400及生理盐水配制，注甘油后24 h处死动物，取血及肾组织标本。
二、检测指标：
2%戊巴比妥钠(40 mg/kg ip)麻醉后开腹，抽取腹主动脉血5 mL,其中2 mL速置于含EDTA和抑肽酶的冰冷试管中，低温离心机分离血浆后测定血浆ET(PET，放免法)，余3 mL血，分别测定血清尿素氮(SUN，二乙酰-肟法)、肌酐(Scr,苦味酸法)及血浆丙二醛(MDA，硫代巴比妥酸法)含量。抽血后，迅速摘取左侧肾脏，于冰板上切取同一部位肾组织及少量肾皮质，分别测定组织cGMP(放免法)及肾皮质钙含量(原子吸收法)并留取部分肾组织(约0.8 mm×0.8 mm×0.8 mm）浸于2%的戊二醛溶液中固定24 h后，做透射电镜观察。
三、药品与试剂：
ET(Sigma CO):ANP(Peninsula Lab);L-Arg(Sigma CO);Nif(石家庄第四制药厂)；ET放免药盒(解放军总医院)；SUN、Scr试剂盒(石家庄试剂厂)；cGMP放免药盒(中科院原子能研究所)。
四、统计处理：
实验数据以±s表示，采用组间均值t检验判断差异显著性。
结果
一、SUN和Scr值：
ARF组大鼠肾功能明显受损，SUN和Scr值均显著高于C组；ARF+ET组SUN和Scr值较ARF组更高，而给予ANP、Nif和L-Arg各组的SUN和Scr值均明显低于ARF及ARF+ET组(表1)。
二、血浆MDA、肾组织cGMP及肾皮质钙含量：
ARF组血浆MDA、肾组织cGMP及肾皮质钙含量均明显高于C组；ARF+ET组血浆MDA、肾组织cGMP及肾皮质钙含量则更为明显地高于ARF组，而给予ANP、Nif及L-Arg各组的MDA和肾皮质钙含量均明显低于ARF及ARF+ET组，肾组织cGMP含量则明显高于ARF及ARF+ET组(表2)。
三、PET水平：
ARF组PET水平明显高于C组，ARF+ET组PET水平则更高于ARF组，而给予ANP、Nif和L-Arg各组的PET升高幅度均明显低于ARF组及ARF+ET组(图1)。
表1 各组血清尿素氮和肌酐值
Tab 1 Values of serum SUN and Scr in different groups (±s，n=6)
Group SUN(mmol/L) Scr(μmol/L)
C 5.53±0.71 68.07±13.62
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