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中国及荷兰人群vWF基因内含子40多态性分析 |
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郭大玮 郎海丽 徐晓莉
摘 要 本文调查了中国汉族及荷兰高加索群体中人类vWF基因内含子40 nt 31/2 215～2 380 区域 HUMFA 31(C) 遗传多态性的基因频率及基因型频率分布。并对两群体之间的分布以拟然比方法进行比较。对9个等位基因片段测序的结果表明, 在nt 31/2 234～2 265区域也有变异存在。提示该座位当被测等位基因DNA片段长度相同时，仍可能存在遗传差异。
关健词 vWF基因，遗传多态性，基因频率，DNA序列
中图分类号 Q39,Q986
Human vWF Gene Intron 40 Polymorphism in Chinese and Dutch Population
GUO Da-Wei LANG Hai-Li XU Xiao-Li
(Department of Forensic Serology,Shanxi Medical University,Taiyuan030001)
Abstract The allele frequencies and phenotype distribution of humanvWFgene intron 40 in the region of nt 31/2 215～2 380 (HUMFA 31(C)) were investigated in the population of the Netherlands and China. The data between two populations were compared by likelihood ratio test. Nine alleles were sequenced and the polymorphism of region of nt 31/2 234～2 265 was revealed.
Key words vWFgene,Polymorphism,Allele frequence,DNA sequence
vWF(von Willebrand factor, vWF) 基因定位于人类第12号染色体短臂，凝血止血过程中其基因产物的作用为：(1) 促进血小板粘附于破损的血管内皮表面; (2) 与血浆中的凝血因子Ⅷ结合并使其稳定。1989年，David J. Mancuso等人〔1〕将该长达178kb的基因克隆，并对其中33.8kb的片段进行测序，指出该基因内含子40中约670bp长的片段含有TCTA重复顺序，而且具有个体差异性。此后，检测该区段多态性的研究结果陆续发表。Peak I. R〔2〕, Ploos van Amstel H. K〔3〕及Kimpton C〔4〕等人分别用PCR方法扩增出了3个不同的多态区，分别位于：nt 31/1890～1991, nt 31/2 215～2 380, nt 31/1 640～1 759。由于这3个多态性区域杂合度高，与vWF缺乏症关系密切，因而倍受法医学家及临床血液学家的关注。
目前, 有关HUMFA 31(A)(nt 31/1 640～1 793)法医学应用的报道较多，而其余两个区域的法医学检验报道仅见于两步法检验，即用一对引物扩增涉及上述3个区域的片段再用内切酶切出3个片段进行检验。然而，由于直接扩增方法(一步法)减少了酶切步骤，电泳结果明了，因而，本文采用一步法对HUMFA 31(C)(nt 31/2 215～2 380)区多态性的中国汉族群体(太原)及荷兰高加索群体(莱顿)基因频率分布情况进行调查，并将两个群体资料加以比较，并且对该区进行测序, 以探明该区重复顺序的变异情况。
1 材料和方法
1.1 PCR方法
血样来自太原111个及莱顿地区114个健康无关个体。DNA由蛋白酶K消化白细胞并经酚-氯仿提取而得。扩增nt31/ 2 215～2 380区域DNA片段的引物序列如下〔3〕:
引物1:5 -TGT ACC TAG TTA TCT ATC CTG, 引物2:5 -GTG ATG ATG ATG GAG ACA GTG, 由荷兰莱顿大学医院合成。
50μl PCR反应液内包含以下成份：1～10ng模板DNA，2.0mmol/L MgCl2, 200μmol/L dNTP, 10mmol/L Tris-HCl, pH 8.0, 50mmol/L KCL, 10mg% 明胶，[1] [2] 下一页
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