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蝗虫染色体分带技术的研究 |
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处理
(1)C带程序：C带显示结构异染色质部分。基本按常规C带处理程序制片，镜检，拍照。
(2)R带程序: R带纹与G、Q带型相反，故称反转带〔11〕。
Giemsa单染法：基本按常规R带处理程序制片，镜检，拍照。
荧光-吉姆萨双染法：在吖啶橙工作液(1毫克/毫升生理盐水, 吖啶橙35毫克/70毫升的1/15mol/L磷酸缓冲液，pH6.8)中5～8分钟，磷酸缓冲液冲洗，蒸馏水冲洗，于欧氏液(欧氏A液，NaCl 16.80克，KCl 0.40克，NaH2 PO4.2H2O 0.14克溶于800毫升蒸馏水中；欧氏B液：CaCl2 0.20克，MgCl2.H2O 0.17克，溶于200毫升蒸馏水中。工作液：pH 6.5，溶液A 800ml，溶液B 200ml)80～85℃ 1～3分钟，5%吉姆萨染液中5～15分钟，水洗，空气干燥，镜检、拍照。
(3)N带程序：N带显示核仁组织区。根据Fox 和 Santos 的技术略作修改。载玻片被浸泡在甲酰胺和2×SSC的1∶1的混和溶液中60℃, 1分钟，蒸馏水冲洗；10% Giemsa染色，镜检、拍照。
(4)Ag带程序〔6〕: 显示核仁组织区的又一种技术。基本按常规Ag带处理程序制片，镜检，拍照。
(5)A带程序〔11〕: 即吖啶橙荧光带。染色体制片在0.1mol/L 磷酸缓冲液(Na2HPO4.12H2O 28.81克和KH2PO4 2.67克溶于 1 000毫升双蒸水中，pH6.8) 在80～85℃下处理8～10分钟；0.01%吖啶橙染液(用0.1mol/L的Mcllvaine缓冲液配制)染色5～8分钟，缓冲液漂洗2～3次；荧光镜检，彩色摄影。
2 结果与讨论
2.1 C带
本文对采自长沙岳麓山的小稻蝗和采自杭州的中华稻蝗进行了C带处理。着丝粒区及端部因含有大量结构异染色质而被深染。(见图版I, 1 中华稻蝗有丝分裂中期的C带)。
细胞分类学意义：由于异染色质的转录活性比常染色质低得多，所以显示结构异染色质的C带较稳定，对物种鉴定具有一定意义。在蝗虫中，C带主要显示为着丝粒带、端带。
2.2 R带
本文分析了减数分裂和有丝分裂过程中的R带(见图版I, 2、3、4 中华稻蝗减数分裂三个期的R带)，并对不同处理条件对R带效果的影响做了探讨。
1.C带(有丝分裂中期);2.R带(减数分裂偶线期);3.R带(减数分裂粗线期);4.R带(减数分裂双线期);5.N带(减数分裂粗线期);6.Ag带(减数分裂双线期);
箭头示8号染色体;三角示10号染色体; 标尺为10微米。
2.2.1 几种因素对R带的影响：本文采用方法(1)后，效果不明显，但采取双染法后出现了明显带纹。可见蝗虫染色体对磷酸缓冲液-吉姆萨并无明显反应，但欧氏液作用很大，很可能抽提出染色体蛋白质而形成特定的带纹。
本文对欧氏液处理温度做了梯度研究：在70℃带纹不明显，在80～85℃带纹清晰易见，90℃以上则染色体出现消化过头导致的溃烂现象。
本文对欧氏液在80～85℃时处理时间做了梯度研究：结果显示1～3分钟则带纹清楚，4～6分钟变化不明显，8、10分钟则消化过头，染色体开始溃烂。
由此可见，温育条件不同则R带产生的效果不同。在80℃、3分钟时带纹最明显。
2.2.2 减数分裂、有丝分裂过程中的R带分析：减数分裂过程中，双线期之前可看到R带纹，尤以粗线期最为明显，第一次减数分裂中期后则看不出带纹。在有丝分裂过程中也可看到R带纹，但不明显。R带分布在染色体全长上，因而与染色体螺旋化程度密切相关；由于粗线期染色体浓缩程度低，较为细长，再加上同源染色体配对，加强了染色粒的显示。
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