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污水等环境中O157大肠杆菌的研究 |
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微生物试剂厂。
1.1.2 诊断血清： O157大肠杆菌和志贺氏菌、EPEC、EIEC诊断血清均购自兰州生物制品研究所，沙门氏多价O血清购自上海生物制品研究所，大肠杆菌H7诊断血清及O157单克隆抗体由福建省卫生防疫站细菌室赠送。
1.2 方法
1.2.1 采样： 选市、郊区饲养场、养殖场、屠宰场、农贸市场、医院作为调查对象。按春、夏、秋、冬四季，每季定时定点采集污水、禽畜粪便和市场砧板标本2次。污水用采样器采水500 ml置灭菌盐水瓶中送检，污水中总大肠菌群数的测定按GB 48-83进行；环境中粪便标本用无菌棉签挑取粪便置肠道增菌肉汤中送实验室增菌；用无菌棉签涂抹市场猪肉等砧板置肠道增菌肉汤中送实验室增菌。
1.2.2 污水样品处理： 于500 ml污水中加入灭菌10 ％碳酸钠溶液2 ml混匀，然后加入10 ％硫酸铁1.75 ml混匀，静置1 h。
1.2.3 增菌： 取沉淀物5 ml加入45 ml肠道增菌肉汤置37℃ 培养18～24 h。
1.2.4 分离培养： 取增菌物接种于SMAC平板上，置37℃培养过夜，然后每皿挑选5个以上无色半透明菌落，分别与O157及H7诊断血清进行玻片凝集试验，对凝集阳性菌先作氧化酶试验，革兰氏染色镜检，排除弧菌科菌株。
1.2.5 鉴定： 生化性状按肠杆菌科常规进行；血清学鉴定按常规法进行O及H抗原玻片凝集试验， 在H抗原鉴定前，将菌株接种于0.5 ％软琼脂扩散数代后进行玻片凝集。凡效价达以上，且无自凝或交叉凝集者，即定为某O和H抗原。
2 结果
2.1 各类污水中O157大肠杆菌检出情况 共检测各类污水268份，结果污水中总大肠菌群数均超过16000个／L， 从生活污水、养猪场污水、市场污水和屠宰场处理前污水中分离到6株O157大肠杆菌， 总检出率为2.2 ％（6/268）。其中屠宰场处理前污水中O157大肠杆菌检出率高达11.1％（2/18），见表1。
表1 各类污水中O157大肠杆菌检出情况
样本 检测数 检出数 检出率％
生活污水 45 1(1) 2.2
市场污水 53 1 1.9
养猪场污水 49 2(1) 4.1
养牛场污水 34 0 0
养鱼场污水 30 0 0
医院处理前污水 28 0 0
屠宰场处理前污水 18 2(2) 11.1
屠宰场处理后污水 8 0 0
合 计 268 6(4) 2.2
注：（）内为O157∶H7大肠杆菌
2.2 禽畜粪便及砧板中O157大肠杆菌检出情况 共采集禽畜粪便等环境中标本620份，检出9株O157大肠杆菌，检出率为1.5％（9/620）。其中猪粪的检出率最高为4.1％（7／172），见表2。
表2 禽畜粪便及砧板中O157大肠杆菌检出情况
样本 检测数 检出数 检出率％
猪粪 172 7(3) 4.1
牛粪 149 0 0
鸡粪 92 1 1.1
鸭粪 80 0 0
各类砧板 127 1 0.8
合计 620 9(3) 1.5
注：（）为O157∶H7大肠杆菌
2.3 不同季节污水等环境中O157大肠杆菌检出情况 从春到秋都能在污水等环境中检出O157大肠杆菌。夏秋季检出率显著高于冬春季（χ2＝4.61，P<0.05),见表3。
表3 不同季节污水等环境中O157大肠杆菌检出情况
季节 检测数 检出数 检出率(％)
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