|
我国汉族妇女维生素D受体基因多态性和骨质疏松关系的研究 |
| |
u;l，其中含10×扩增缓冲液；dNTPs各200μmol/L；引物P1、P2各0.5μmol/L；模板DNA3μl。置热循环仪(Ericom INC)中95℃预变性7min，再加Taq DNA聚合酶3U。按下列程序循环35次，即95℃变性1min，70℃退火1min，72℃延伸2min，最后于72℃再延伸7min。取产物5μl经1%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶(EB)染色，紫外灯下观察扩增是否成功。
3.扩增产物的限制性酶切：PCR扩增产物10μl(约0.3μg)直接用3U BsmⅠ酶切，65℃，过夜。反应终止后，产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳，EB染色40min，以DNA片段长度标准物为参考，紫外检测仪下观察结果并照像。VDR基因判定参照文献〔3〕方法， 即缺乏相应酶切位点为BB型 (1 850bp)，Bb型 (1 850、1 200、650bp)为杂合子，bb型(1 200、650bp)则代表存在相应酶切位点的等位基因。
4.BMD测定：双能X线吸收仪(DEXA)检测BMD。
5.统计学处理：使用SAS软件包，基因频率采用基因计数法计算，基因型频率比较采用似然比χ2检验。
结 果
一、PCR 扩增 VDR 基因：模板DNA提取后，经PCR扩增，扩增出特异性片段(1 850 bp)。
二、PCR-RFLP法确定VDR基因：共测定162例样品，用限制性内切酶BsmⅠ检出2种不同基因型，即Bb、bb，未检出BB等位基因。
三、VDR基因型频率分布：按Hardy-Weinberg平衡定律计算不同组别研究对象VDR基因型频率，对照组中VDR基因型bb、Bb、BB分别为91.36%(148/162)、8.64%(14/162)、0%；骨质疏松组分别为82.35%(14/17)、17.65%(3/17)、0%，两组均未检出BB基因型，并且，两组基因型频率比较差异无显著性(P＞0.05)。
四、不同人群中VDR基因型频率分布：由附表可见，我国健康汉族中老年妇女VDR等位基因频率与美国、澳大利亚、法国、日本差异有非常显著性(P＜0.001)。中国汉族人以bb型最多，占91.36%，美国、澳大利亚、法国，该基因型占第二位(28%～32%)。韩国、日本则以此型最多，在数值上与我国汉族较为接近，但也有一定差别。
附表 不同人群VDR基因型频率分布
bb Bb BB 作者及文献
中国汉人
(162例)
91.36
(148) 8.64
(14) 0 本文
美 国
(85例) 28
(24) 55
(47) 17
(14) Hustmyer FG〔4〕
澳大利亚
(244例) 28
(68) 50
(122) 22
(54) Morrison NA〔1〕
法 国
(189例) 32
(61) 51
(96) 17
(32) Garnero P〔5〕
日 本
(102例) 55
(56) 38
(39) 7
(7) Yamagata Z〔6〕
韩 国
(70例) 85.7
(60) 12.9
(9) 1.4
(1) Lim SK〔3〕
注：括号外数字为频率(%)，括号内数字为例数。
讨 论
Morrison等〔1〕研究认为，VDR基因型可以预测骨质疏松。他们对白种人调查时，发现60岁以上健康妇女，75%的BB基因型的BMD低于骨折阈，而61%的bb基因型高于骨折阈，骨质疏松的患者，BB基因型表现极为活跃。
我们的研究结果，中国健康汉族中老年妇女和骨质疏松患者VDR基因多态性的分布频率，均以bb基因型最多，分别为91.36%和82.35%，两组均未检测出BB基因型，说明BB基因型还不能作为汉族人群预测骨质疏松的一项指标。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 成都市3 333例老年人健康状况调查分析
下一个医学论文： 广东开平 博罗农村老年人生活质量调查
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文