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活化淋巴细胞及其染色质诱导IgG1亚类抗双链DNA抗体生成 |
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淋巴结，用Tris-NH4Cl破坏红细胞，用完全1640培养液调整细胞浓度为2×106ml-1，分别加ConA(终浓度10 μg/ml)及LPS(终浓度10 μg/ml)或IL-2(终浓度1 000 U/ml)，于37℃ 5%CO2培养72 h，分别经或不经0.3%戊二醛处理，按2×107 cells/只皮下注射，1次/w，共3次。
1.2.2 活性细胞核及其染色质的提取和免疫 按何开玲教授改良Chiu法［7］，从ConA活化的和未活化的脾细胞中提取活性和非活性细胞核及染色质，分别按细胞核2×107个/只、染色质50 μg/只皮下注射，1次/w，共3次。3次免疫后眼眶后静脉丛采血，并分离血清。
1.2.3 IgG类抗双链DNA抗体检测［8］ 用ELISA方法检测IgG类抗dsDNA抗体生成，酶标板用0.5%硫酸鱼精蛋白预处理。S1核酸酶处理小牛胸腺DNA按50 μg/ml作为包被抗原。检测血清除特别注明外均取免疫后第21天血清，血清样品按1∶50稀释。
2 结果
2.1 活化的淋巴细胞诱导IgG类抗dsDNA抗体生成 如表1所示，正常鼠和未活化淋巴细胞免疫的小鼠没有一例出现IgG类抗dsDNA抗体；而经ConA激活的T淋巴细胞、经LPS激活的B淋巴细胞及IL-2 活化的LAK细胞免疫的小鼠均检测到高滴度IgG类抗dsDNA抗体生成。按OD≥OD正常+3s为阳性，则阳性率为100%(52/52)。
表1 活化的淋巴细胞诱导IgG类抗dsDNA抗体生成
Tab.1 Induction of anti-dsDNA IgG antibody by immunization with activated lymphocytes
Immunized mice
n
Anti-dsDNA anti-
bodies(OD,x±s) Anti-dsDNA antibodies
positive rate
Control 15 0.057±0.028 —
Resting spleen cells 12 0.081±0.039 0/12
Activated spleen 20 1.018±0.263 20/20
cells with ConA
Activated spleen 20 0.945±0.283 20/20
cells with LPS
Activated spleen 12 0.722±0.309 12/12
cells with IL-2
Note:control mice are normal animal without immunization, —.no positive rate
2.2 戊二醛处理对活化淋巴细胞诱导IgG类抗dsDNA抗体生成的影响 实验过程中，通常用戊二醛固定淋巴细胞，使其丧失生物活性而保留免疫原性。为了解戊二醛处理对抗原性的影响，我们分别观察了T、B活化淋巴细胞免疫前经戊二醛处理与不处理对诱导IgG类抗dsDNA抗体生成情况的影响。结果经戊二醛处理与不经处理的活化淋巴细胞均能诱导IgG类抗dsDNA抗体生成，两者比较没有显著差异(P＞0.5，数据未列出)，提示淋巴细胞的活化才是诱导IgG类抗dsDNA抗体生成的关键。
2.3 活性细胞核及活性染色质诱导IgG类抗dsDNA抗体生成及其动态变化 免疫前小鼠血清中检测不到dsDNA抗体，活性细胞核或活性染色质3次免疫后7 d，即可测出抗dsDNA抗体，抗体滴度于免疫后14 d时到高峰，而后逐渐降低，至少可持续8 w。与免疫后14 d血清比较，按OD≥OD免疫前+3s为阳性，则活性细胞核或活性染色质免疫组的阳性率为100%(10/10)。静止细胞核和静止染色质免疫的小鼠无一例阳性，结果提示活化淋巴细胞的核及染色质是诱发双链DNA抗体产生的有效免疫原。
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