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树突状细胞对小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的作用 |
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离的脾DC(1.0×106 ml-1),加入Tg(100 μg/ml),37℃、5%CO2孵育18 h,洗涤3次,作为Tg预刺激DC,在Tg+CFA注射后3 d,皮下注射Tg预刺激DC,每只0.5 ml(含5×105 DC);③33D1注射组,注射DC同时,每只小鼠尾静脉注射33D1单抗;④正常对照组,未作任何处理。以上各组动物分别于免疫后第6周和第12周检测各项指标。 1.4 小鼠血清TgAb检测 采用常规间接ELISA法,结果以OD490表示。 1.5 体外Tg刺激的淋巴细胞增殖试验 分离小鼠脾脏单个核细胞,配制细胞浓度为1.0×107 ml-1,加入96 孔细胞培养板中,加入Tg(20 μg/ml),37℃、5%CO2孵育72 h, 在终止培养前6 h , 加入 MTT(5 μg/ml),继续培养6 h,加入酸化异丙醇,振荡10 min,待完全溶解后检测OD570值。 1.6 小鼠血清IL-1检测 采用C3H/HeJ小鼠胸腺细胞增殖试验,结果以OD570值表示。 1.7 TNF的诱生及检测 分离小鼠脾脏单个核细胞,配制细胞浓度为1.0×107 ml-1,加入ConA(5 μg/ml),37℃、5%CO2孵育48 h,收集上清。TNF活性检测参见文献[4],结果以细胞毒性(%)表示。 1.8 病理学检查 取小鼠甲状腺组织,作常规病理形态观察。
2 结果 2.1 小鼠血清TgAb水平 经Tg+CFA初次免疫后第6周,EAT组和DC组小鼠血清中TgAb均较正常对照组有明显升高,尤以DC组为著;至第12周,EAT组和DC组小鼠血清中TgAb 较正常对照组升高4倍以上,但EAT组和DC组之间无显著性差异,经33D1单克隆抗体处理组小鼠血清中TgAb水平较DC组有明显下降,结果见表1。
表1 小鼠血清TgAb水平(n=5) Tab.1 The level of thyroglobulin antibody (TgAb) in serum(n=5)
Groups 6 weeks 12 weeks Control 0.21±0.05 0.31±0.08 EAT 0.44±0.071) 1.36±0.121) DC 0.67±0.101)2) 1.47±0.181) 33D1 NT 0.68±0.063)
Note:1)compared with control:P<0.01;2)compared with EAT:P<0.01;3)compared with DC:P<0.01; 4)NT:not tested
2.2 体外Tg刺激的淋巴细胞增殖试验 无论在初次免疫后第6周还是第12周,EAT组和DC组经Tg刺激的淋巴细胞增殖能力均强于正常对照组,并且DC组的增殖能力亦均高于EAT组,经33D1单克隆抗体处理的增殖能力明显低于DC组,结果见表2。
表2 不同组别小鼠体外Tg刺激的淋巴细胞增殖能力比较(n=5) Tab.2 The comlparison of lymphocyte proliferation to Tg in different groups(n=5)
Groups 6 weeks 12 weeks Control 0.36±0.05 0.42±0.05 EAT 0.49±0.041) 0.67±0.061) DC 0.69±0.041)2) 1.79±0.021)3) 33D1 NT 0.57±0.084)
Note:1)compared with control:P<0.01; 2)compared with EAT:P<0.01;3)compared with EAT:P<0.05;4)compared with DC:P<0.01; 5)NT:not tested
2.3 不同组别小鼠IL-1和TNF水平 各组小鼠经初次免疫后第12周时IL-1和TNF水平见表3,结果显示EAT组和DC上一页 [1] [2] [3] 下一页 上一个医学论文: 细胞因子对小鼠 2 I 型前胶原基因启动子活性影响的研究 下一个医学论文: 活化淋巴细胞及其染色质诱导IgG1亚类抗双链DNA抗体生成
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