|
ICAM |
| |
［2］。本研究从整体和局部角度对着床过程中外周血淋巴细胞(PBLC)及子宫内膜细胞(EC)／蜕膜细胞(DC)ICAM-1的不同表达特点进行了动态观察和对比性分析，并探讨了ICAM-1在着床过程中的整体及局部作用。
1 材料与方法
1.1 动物模型制备及取材 取健康成年雌、雄性昆明系小鼠，自然交配。以合笼次日有阴栓者确定为妊娠第1天(D1)，并依次计算妊娠天数。未孕鼠为对照(Con)。动物模型由中科院发育生物学研究所实验动物中心制备，实验共分6组(Con,D1～D5)，每组雌性小鼠5只。
小鼠经眼球取血300～500 μl，肝素抗凝备用。取血后将鼠处死，开腹，切下子宫，纵向剪开，经生理盐水清洗后滤纸吸干，以手术刀片轻轻刮取内膜组织。EC／DC悬液制备按文献［3］方法进行，调整细胞数为1×106 ml-1。
1.2 试剂 FITC标记抗小鼠ICAM-1(CD54单抗，Clone：3E2(BD-Pharmingen，美国)。IgG1-FITC同型荧光对照单抗，FACSLysing红细胞裂解液(BDIS，美国)。
1.3 荧光染色 所有细胞染色均采用直接免疫荧光标记。外周抗凝血采用全血红细胞裂解技术［4］。取EC／DC悬液离心去上清，加入FITC标记抗小鼠ICAM-1单抗20 μl，混匀，避光染色30 min；PBS洗细胞两次，悬于0.6 ml PBS中上机。每组样品均设有IgG1-FITC同型荧光对照。
1.4 流式细胞术分析 流式细胞术分析采用FACSCalibur型流式细胞仪(Becton-Dickinson，美国)，激光光源激发光波长488 nm，FITC荧光检测波长530 nm。所有流式参数均采用CellQuest(Becton-Dickinson)软件进行获取和分析。在前向角及侧向角三维散射光图中对PBLC进行设门(R1)，使R1内PBLC大于98%，单核及粒细胞低于2%(图1a)；由于EC／DC的散射光相对不集中，在其二维散点图中对整个EC／DC群体进行设门(R2)(图1b)。获取细胞总数10 000个。在FL1荧光图中，以IgG1-FITC荧光对照为基础测定ICAM-1阳性细胞表达比率(图1c)。每组进行3个实验取均值(x±s)。两组间统计资料比较采用t检验。
图1 流式细胞术分析
Fig.1 FCM analysis
2 结果
2.1 着床期外周血淋巴细胞ICAM-1的表达 由表1及图2可见，着床过程小鼠外周血淋巴细胞ICAM-1的表达存在明显的动态变化，其表达水平于D1即开始降低，D2降至最低点，D3开始恢复，至D4 ICAM-1的表达基本恢复到Con水平。
图2 ICAM-1在着床期PBLC和EC／DC中的动态变化
Fig.2 Dynamic changes of ICAM-1 in PBLC and EC／DC at peri-implantation stage
表1 ICAM-1在着床期小鼠PBLC及EC／DC中的表达
Tab.1 ICAM-1 expression in mouse PBLC and EC/DC at peri-implantation stage
Con D1 D2 D3 D4 D5
PBLC 39.48±4.08 28.74±2.361) 20.98±1.501) 25.80±1.301) 37.02±1.30 37.05±2.20
EC/DC 64.40±3.32 58.20±3.82 44.05±7.281) 28.56±5.771) 22.85±3.821) 32.33±1.531)
Note: 1)P＜0.05 vs control;PBLC:peripheral blood lymphocyte;DC:decidua cell;EC:endometrial cell
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 早产合并临床绒毛膜羊膜炎时母血和脐血中细胞因子的检测
下一个医学论文： 用甲基纤维素半固体培养基筛选杂交瘤细胞
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文