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维吾尔族人群抗原处理相关转运体 TAP 基因多态性及与类风湿关节炎的相关性 |
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have its own characteristics. TAP1B could make DR4 individuals more susceptible to RA.
Key words Transport-associated antigen processing Polymorphism Arthritis rheumatoid
1992年Powis在抗原递呈细胞(APC)内发现一种称为抗原处理相关转运体(Transporter-associated antigen processing,TAP)蛋白, 有TAP1 和TAP2两种形式，介导抗原多肽穿过胞浆内质网，编码TAP的基因位于MHCⅡ类区域,有遗传多态性［1］。本文试图分析我国维吾尔族（以下简称维族）正常人及类风湿关节炎(RA)患者TAP 等位基因分布特点，以了解TAP等位基因多态性与RA的关联。
1 材料与方法
1.1 实验对象 选择住院或门诊维族RA患者(RA组)39例及健康献血者41例(正常对照组，NC组)。RA诊断依据ARA 1987年标准［2］。所有受试者来自新疆维吾尔自治区人民医院就诊患者及健康献血员，且在三代内未与其他民族通婚。取EDTA抗凝血。
1.2 实验方法
1.2.1 外周血DNA提取 按常规的方法进行。
1.2.2 编码TAP1-333和637及TAP2-379，565和665位氨基酸等位基因多态性检测 采用PCR-扩增阻碍突变系统(PCR-ARMS)［3］。扩增时每一标本同时作A,B,C三个平行管，A 管加共同引物,B和C管分别加一侧共同引物和一个等位基因特异性引物， 扩增产物于2%琼脂糖凝胶70 V电泳1 h。
1.2.3 编码TAP2-651位氨基酸等位基因多态性检测 采用PCR-RFLP分析法［4］。扩增产物以内切酶Bsaj 37℃水浴2 h,12% 丙烯酰胺凝胶200 V电泳2 h。阳性条带为247 bp,酶切后显示167 bp及 80 bp条带者为 Arg-651，仅显示 247 bp 者为 Cys-651。
1.2.4 编码TAP2-687位氨基酸等位基因鉴定 采用PCR-SSOP技术［5］。尼龙膜60℃烤干后点样, 0.1 mol/L NaOH变性6 min，80℃交联1 h。 4×SSPE预杂交2 h。加γ-32P-ATP探针, 56℃杂交3 h。室温和58℃洗膜，0.5×SSPE 室温洗3 min。-75℃ 24 h后显影。
1.2.5 DR4阳性标本的DRB1基因第二外显子扩增 用组特异性引物。
1.2.6 TAP1和TAP2等位基因命名 参见文献［6］。
1.3 统计学分析 分别计算和比较基因型、表现型、单倍型频率、比数比(OR)和95%可信限(95%CI)。
2 结果
2.1 维族RA患者及正常人TAP等位基因基因型见表1，TAP1等位基因基因型在RA及NC组以 333-I 和 637-D为主，频率在两组间的OR相差无显著意义(P均大于0.05)。TAP2 379，565，651，665及687位等位基因在NC组中频率较高者为 V-A-R-T-Q。TAP2 379-I,565-T和 687-S在RA组显著高于NC组(OR为2.75 ,2.02和4.35, P<0.01或0.05,95%CI为1.37～5.47, 1.07～3.78和2.23～8.50)。其余等位基因在两组间均无显著差异。
表1 维吾尔族RA患者及正常人TAP等位基因基因型频率
Tab.1 The frequency of genotype for TAP alleles in RA patients and controls of Weiwuer nationality
Sites (Numbers of allele) RA(78) NC(82)
TAP1
333-I 54 60
V 24 22
637-D 42 56
G 36 26
TAP2
379-I 341) 18
V 44 64
565-A 33 49
T 452) 33
651-R 77 79
C 1 3
665-A 13 18
T 65 64
687-Q 29 59
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