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粘附分子选择素在IgA肾病中变化的临床意义 |
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。根据临床表现分为肉眼血尿组、尿检异常组、肾炎综合征组、肾病综合征组及肾功能减退组。并按WHO 1982年病理分级标准分为5级。另外25例健康工作人员血浆及10例正常肾组织作为对照。
1.2 方法
1.2.1 酶联免疫吸附试验 静脉采血，置于含1/10体积2％EDTA抗凝管内，3 000 r/min离心10 min，收集上层血浆置-20℃下保存待测。血浆P选择素检测试剂盒购于苏州医学院，按说明书进行操作。
1.2.2 免疫组化方法 采用链菌素抗生物素蛋白-生物素酶标法(LSAB)。小鼠抗人P选择素单抗购于苏州医学院，LSAB试剂盒购于福建迈新生物技术开发公司（美国加州生物技术公司产品），操作按说明书进行。PBS代替一抗作空白对照。结果判断：根据染色阳性细胞占该类细胞的比例进行双盲打分(4级半定量法)，0分：阴性；0.5分：阳性细胞少于10%；1.0分：阳性细胞少于25%；2.0分：阳性细胞少于50%；3.0分：阳性细胞大于50%。
1.2.3 原位杂交 肾活检标本经O.C.T包埋后-80℃保存，原位杂交当日冰冻切片(5～6 μm)。反义P选择素寡核苷酸探针（35 bp）由中科院上海细胞生物研究所合成，地高辛标记和检测试剂盒购自德国宝灵曼公司。原位杂交程序参照试剂盒说明书，设空白对照。
1.2.4 统计学处理 血浆P选择素含量以均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用t检验；两组肾小球P选择素表达水平比较采用等级秩和检验；肾小管、肾间质P选择素表达与肾小管间质病变程度相关性采用等级相关分析。
2 结果
2.1 血浆P选择素含量 45例IgA肾病血浆P选择素较正常人组明显增高(P<0.01)，其中肾病综合征组和肾功能减退组又显著高于肉眼血尿组、尿检异常组和肾炎综合征组，见表1。
表1 IgA肾病患者血浆P选择素含量变化(x±s)
Tab.1 P-selectin level in patients with IgA nephritis(x±s)
Groups n P-selectin (ng/ml)
Controls 25 32.72±10.65
IgA nephropathy 45 49.12±25.252)
Gross hematuria 13 38.95±16.21
Abnomal urine analyses 6 40.16±19.851)
Nephritis syndrome 12 48.52±21.322)
Nephropathy syndrome 8 72.12±27.433)4)
Renal function insufficient 6 65.34±25.873)4)
Notes:compared with the controls 1)P<0.05 2)P<0.01 3)P<0.001; compared with the groups of gross hematuria, abnormal urine analyses and nephritis syndrome 4)P<0.01
2.2 肾组织中P选择素表达 正常人肾组织中P选择素基本不表达。在IgA肾病肾组织中，P选择素主要分布于肾小球的系膜区、毛细血管及小管间质等部位(图1)，Ⅳ级和Ⅴ级的肾小球P选择素表达水平显著高于Ⅱ级和Ⅲ级(H=5.42,P<0.05)。肾小管间质病变程度(根据肾小管萎缩、间质炎细胞浸润和纤维化程度分为轻、中、重)与P选择素在肾小管、间质的表达水平明显相关(分别为rs=0.395和rs=0.371,P均<0.05)。
图1 免疫组化LSAB法检测显示肾小管上皮细胞P选择素阳性染色(×400)
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