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能与大肠杆菌O157 H7 抗血清交叉凝集的5种细菌的分离和鉴定 |
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57抗原的其它种属的细菌，其中4种为国内外首次发现，2株检出菌亦同时携带H7抗原。经保种半固体保存10～28个月仍能与O157血清发生交叉凝集反应。现将结果报告如下：
1 材料与方法
1.1 菌株来源 在莆田、福州地区医院采集腹泻患者粪便，在屠宰场或菜市场采集畜禽粪便标本，直接划种于SMAC平板，肉类标本经EC肉汤增菌后作细菌分离培养。菌株编号详见表1。
1.2 血清学和生化试验 在SMAC平板上挑取疑似O157∶H7及其它特征的菌落与大肠杆菌O157诊断血清进行玻片凝集试验，对强凝集者（++～+++）以O157单克隆抗体及H7抗血清进一步作玻片凝集，同时接种双糖琼脂斜面，进行常规生化鉴定，并用全自动微生物鉴定系统（VITEK-AMS）作验证，该设备及GNI鉴定卡系法国生物梅里埃公司产品。阳性参考菌株EHEC 882364来自中国预防医科院流研所。
1.3 诊断试剂 大肠杆菌O157及H7单价诊断血清、O157单克隆抗体、EPEC、EIEC、ETEC、ESIEC、志贺氏菌、沙门氏菌O血清以及PCR EHEC-Hly引物购自中国预防医科院流研所与中国药品生物制品检定所，常规生化管与培养基由本实验室自配。
1.4 肠毒素检测 采用乳鼠灌胃法及兔肠结扎法。
1.5 药敏试验 采用平板药物稀释法，抗生素新生霉素、万古霉素、cefixime（Sigma产品）购自北京陆桥商检高技术公司；亚碲酸钾（化学纯）购于上海徐汇化工服务部。含药基础培养基为SMAC琼脂，含药浓度新生霉素20 μg/ml, Cefixime 0.05 μg/ml，亚碲酸钾2.5 μg/ml，万古霉素4.0 μg/ml。
2 结果
2.1 菌体形态和初筛 在SMAC平板上（37℃ 24 h）挑取不同类型的菌落，以大肠杆菌O157单价血清进行试探性玻片凝集，结果有4类菌落凝集阳性（表1）。这些菌株在血琼脂平板上多数形成灰白菌落，只有FP21出现溶血环，其它7株均不出现溶血。经革兰氏染色镜检，8株检出菌均为革兰氏阴性杆菌，无芽胞。
表1 O157血清凝集交叉菌株的菌落形态
FP21 FP38 FG2 FP5 FB7 PC11 PC67 PC71 EHEC882364
SMAC
菌落形态 乳白混浊 红色圆形 红色圆形 无色透明 无色透明 无色圆形 无色半透明 无色半透明 无色圆整
光滑扁平 光滑隆起 光滑隆起 光泽扁平 光泽扁平 光滑湿润 光泽湿润 光泽湿润 稍混湿润
2～2.5 mm 1.5～2.5 mm 1.5～2.5 mm 约1 mm 约1 mm 1.5～2.0 mm 1.5～2.0 mm 1.5～2.0 mm 1.5～2.0 mm
2.2 血清学试验 对初筛后的O157血清凝集阳性菌株3次传代，进一步以大肠杆菌O157及H7单价血清进行玻片凝集反应，结果这8株仍能与O157血清发生强凝集其中FP5、FB7还能同时与H7抗血清发生凝集反应，FP3、FG2凝集颗粒较小，其它6株凝集颗粒同对照株）。这些菌株与O157单克隆抗体，志贺氏4种多价血清，沙门氏菌A-F血清，EPEC、EIEC、ETEC、ESIEC多价血清均不发生凝集，在生理盐水中不自凝。将这些菌株接种半固体保存10～28个月，其O157凝集度及反应速度仍然如初，但FP5、FB7丧失了与H7抗血清的凝集力（表2）。
检出菌株经100℃加热30 min再行O157血清凝集，结果3株仍保持原有凝集度，1株F（G2）凝集度及反应速度均降低，4株变为阴性，见表2。
表2 与O157抗血清交叉凝集菌株血清学试验结果
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