|
UV |
| |
李晓丹 李进
【摘要】 目的 观察经UV-C照射后的凋亡SMC内Bcl-2蛋白表达的情况。 方法 应用组织贴块法进行体外SMC培养，SP免疫组织化学技术和图像分析技术检测经UV-C照射后的SMC内Bcl-2蛋白的表达。 结果 UV-C照射体外SMC后，细胞出现典型的凋亡形态学和生化指标的改变；凋亡SMC胞浆内Bcl-2表达下降和出现胞浆内Bcl-2的迁移和再分布入核。 结论 UV-C照射可引起体外SMC凋亡，且Bcl-2可能参与了UV-C诱导的SMC凋亡的基因调控过程。
【关键词】 平滑肌细胞 凋亡 紫外线 Bcl-2
STUDY ON EXPRESSION OF Bcl-2 PROTEIN IN APOPTOTIC
SMCS INDUCED BY ULTRAVIOLET-C IN VITRO
Li Xiaodan，Li Jin△
(Department of Internal Medicine of Guangzhou Medical College PLA, Guangzhou)
【Abstract】 Objective To study expression of Bcl-2 protein in apoptotic SMCs induced by Ultraviolet-C. Methods SMCs were obtained utilizing traditional SMCs culture methods. Expression of Bcl-2 protein in apoptotic SMCs induced by UV-C were observed by means of immunohistochemical and image analysis. Results SMCs were found to undergo apoptosis which was characterized by morphological changes and DNA fragmentation after exposure to UV-C. This exposure led to a decline in expression of Bcl-2 in cytoplasm and a migration and redistribution from cytoplasm into the nucleus. Conclusion UV-C can induce apoptosis of SMCs in vitro and Bcl-2 gene perhaps is one important regulative gene in this apoptotic process.
【Key words】 smooth muscle cells; Apoptosis; Ultraviolet; Bcl-2
材料和方法
1. 体外血管平滑肌细胞(smooth muscle cell, SMC)培养及鉴定［1］
选取重约150～200g的成年SD大鼠，无菌条件下取出胸主动脉，剥离中膜，应用组织贴块法进行原代及传代培养，应用SP免疫组织化学方法检测细胞内α-SM Actin蛋白的表达。
2. UV-C诱导体外SMC凋亡模型的建立及其检测
取第4～7代生长良好的SMC，胰蛋白酶消化，以105/ml浓度接种于D100mm平皿中的盖玻片上，应用细胞培养超净台紫外消毒灯(20W、220V、50Hz)发射的UV-C波段光源(254nm)垂直照射距离其10cm处的SMC 10 min(照射时去盖，0.5mlD-Hank液湿润)后，继续培养，观察细胞形态变化，并分别取照射后24h、48h、72h的细胞，HE染色；于24h、48h提取细胞总DNA，进行琼脂糖凝胶电泳，观察其图谱。
3. UV-C诱导的凋亡SMC内Bcl-2蛋白表达的研究
3.1 免疫组织化学方法：参照SP试剂盒(福州迈新公司)提供的方法，并以PBS缓冲液代替一抗，设立相应的阴性对照片。以超净工作台紫外光源UV-C照射接种于平皿中的盖玻片上的大鼠主动脉SMC 10min，方法同上，继续培养，分别取照射后24h、48h细胞及相应的正常细胞，D-Hank液中洗1～2次，0.01mol/L PBS冲洗2～3次，纯丙酮固定10min，自然[1] [2] 下一页
上一个医学论文： 表皮生长因子及其受体在食管癌中的表达
下一个医学论文： 去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文