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表皮生长因子及其受体在食管癌中的表达 |
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1］首先发现的。近年来发现，erb-B癌基因产物与EGF受体十分相似。已有报道，在肺癌，乳腺癌，胃癌，膀胱癌，脑瘤，胰腺癌等［2］肿瘤组织中，含有EGF或EGF受体，并发现EGF受体同肿瘤病人的预后有关［3］。EGF能刺激某些肿瘤细胞株的生长［4，5］。可见，EGF在肿瘤的发生发展过程中起重要的作用。有关表皮生长因子同食管癌发生的关系方面，近来国外已有少数报道，且报道结果不一［6］，国内尚未见报道。为进一步探讨表皮生长因子同食管癌发生、发展的关系。我们运用免疫组织化学方法，检测食管癌组织中EGF及EGF受体的表达情况，结果发现，34例食管癌病例中EGF和EGFR均有不同程度的表达，EGF强阳性组18例，EGFR强阳性组18例，EGF和EGFR的表达分为M型和D型，M型较多发生淋巴结转移(P<0.05)。提示EGF及EGFR强阳性表达同病人的预后有关。
材料和方法
1.材料
1.1 食管癌标本：食管癌病人术前均未经化疗和放疗。取材部位为癌实质、癌旁组织、淋巴结及正常组织。取材后，标本经10%福尔马林固定，常规脱水，56℃石蜡包埋。每例标本连续切片，厚5μm。1张行HE染色做病理学检查，2张行免疫组织化学染色。共采集标本34例，均为食管鳞癌。
1.2 主要试剂：
1.2.1 羊抗人EGF多克隆抗体；鼠抗人EGF-R单克隆抗体；人的EGF纯品；均为美国UBI公司产品。
1.2.2 兔抗羊ABC试剂盒：马抗鼠ABC试剂盒；均为美国Vector公司产品。
2.方法
2.1 免疫组织化学染色过程：按常规ABC染色方法进行，一抗浓度分别为：抗EGF多克隆抗体1∶200；抗EGF-R单克隆抗体1∶100。标本置封闭湿盒中4℃冰箱孵育48h；然后滴加生物素化抗体37℃孵育30min；最后滴加ABC试剂，37℃孵育60min，显色后苏木素复染核，常规脱水封片。
2.2 对照实验：阳性对照：(1)EGF染色以人的颌下腺为阳性对照。(2)EGF受体染色以正常人胎盘组织为阳性对照。阴性对照：(1)空白对照：以PBS代替第一抗体。(2)阴性对照，以正常血清(EGF用兔血清，EGF受体用马血清)代替第一抗体。
3.病理分型
按食管癌国际分级标准将食管癌分为3级：高分化鳞癌(鳞癌Ⅰ级)，中分化鳞癌(鳞癌Ⅱ级)，低分化鳞癌(鳞癌Ⅲ级)。
4.结果判定
免疫组织化学结果，根据颜色将免疫反应强度分级如下：
(±)反应呈淡黄色，反应产物隐约可见。(+)反应明显，产物清晰可见，呈黄棕色。(++)反应较强，反应产物呈棕色。(+++)反应强，反应产物呈棕褐色。(定义±～+组为弱阳性组，++～+++为强阳性组)
5.统计学处理采用χ2检验
结 果
1.表皮生长因子(EGF)与食管癌
人的颌下腺作为阳性对照。可见反应呈棕褐色，阳性反应的部位主要为分泌管、小叶内导管及小叶间导管。管的腔面阳性反应较强。腺末房无颜色反应呈阴性(图1)。本实验中，34例食管癌组织均为食管鳞癌。根据EGF免疫反应的强弱的不同，分为弱阳性组(±～+)。强阳性组(++～+++)。根据EGF阳性反应类型的不同，食管癌又分为M型(即在同一癌组织切片中EGF着色程度不同)，D型(即在同一癌组织切片中EGF阳性染色均一)。
1.EGF同食管癌分级的关系：34例食管癌中，EGF强阳性18例(占53%)，其中Ⅰ级鳞癌6例，Ⅱ级鳞癌8例，Ⅲ级4例。弱阳性组16例(占47%)，其中Ⅰ级6例，Ⅱ级4例，Ⅲ级6例。P>0.05(χ2检验)，显示差异无显著性(表1)。
表1 表皮生长因子与食管癌分级的关系
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