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HLA |
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兰炯采 陈 强 郑世荣 石 宁 张祖文
摘 要 目的：用聚合酶链反应(PCR)和血清学方法检测HLA-B27，并进行比较。方法：采用PCR技术检测78例可疑为强直性脊椎炎患者样本的HLA-B27基因，并与血清学结果比较。结果：36例具有B27基因者中24例同时作血清学试验，5例血清学难以判定结果，并与PCR结果不一致。42例无B27基因者中21例同时作血清学试验，3例血清学结果为可疑。结论：B27基因检定技术与血清学方法比较，有快速、简便、准确性高等优点。
关键词 HLA-B27 聚合酶链反应 基因检定
中国图书分类号 R392.4
Method of HLA-B27 genotyping
LAN Jiong-Cai,CHEN Qiang,ZHENG Shi-Rong et al.
Institute of Blood Transfusion,Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Chengdu 610081
Abstract Objective:A comparison study of polymerase chain reaction (PCR) and serological typing method was used to detect HLA-B27.Methods:78 samples from patients suspected with ankylosing spondylitis (AS) were genotyped by PCR and some of them were assayed by serological typing.Results:24/36 samples with HLA-B27 gene were compared with serological typing ,the results of 5 samples serological typing were dubious or contradictory with PCR genotyping.21/42 samples without HLA-B27 gene were compared with serological typing,the results of 3 samples serological typing were dubious.Conclusion:The method of B27 genotyping by PCR is more rapid,inexpensive and exact than phenotyping by serology.
Key words HLA-B27 PCR Genotyping
HLA-B27与强直性脊椎炎(Ankylosing spondylitis,AS)及结膜—尿道—滑膜综合征(Reiter综合征)等疾病相关，前者相对危险率(RR)为87.4，后者为37.0［1］，具有临床辅助诊断价值。既往采用血清学技术检测HLA-B27表型，本文中我们采用PCR技术进行了HLA-B27基因检定研究。
1 材料与方法
1.1 样本 成都及南京地区有腰椎运动受限、腰背疼痛、胸廓扩张受限、虹膜炎病史等症状之一即怀疑为AS者78例，采血做HLA-B27基因检定及表型检测。
1.2 HLA-B27表型检测 采患者静脉血2 ml，肝素抗凝，以标准微量淋巴细胞毒试验检测HLA-B27表型。检定血清板含阳性对照、阴性对照及4孔不同批号的B27抗血清(相关系数r分别为0.84,0.86,0.90,0.90；强度SI%分别为75，77，88，91)。
1.3 HLA-B27基因检定
1.3.1 DNA模板提取 采患者静脉血0.3 ml，EDTA抗凝，快速盐析法提取DNA［2］。
1.3.2 PCR引物设计 根据已公布的HLA-B27 DNA序列［3］，参考Olerup方案设计B27序列特异性引物［4］；内对照引物5′-CAG、TCT、GTG、CCT、TGG、CGT、TGC，5′-GGC、TAC、GTG、GAC、GAC、ACG、CT，扩增产物为144 bp，可以检出WHO正式命名的8个B27等位基因，包括中国人常见的B27*04，B27*05和B2[1] [2] 下一页
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