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吸入一氧化氮对致敏大鼠气道阻力以及气道炎症的影响 |
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ttention should be paid in the clinical practice when inhaled NO is used in the treatment of bronchial asthma.
MeSH Nitric oxide；Administration inhalation;Asthma; T-lymphocyte
支气管哮喘(哮喘)是气道慢性炎症性疾病,支气管平滑肌痉挛是其重要的临床特征之一。一氧化氮(nitric oxide,NO)对气道平滑肌有直接舒张作用,并调节支气管的功能状态［1］,因此有人设想把NO作为一种新型支气管扩张剂在临床使用,尤其是哮喘危重发作时使用。但吸入NO对哮喘气道炎症,尤其是淋巴细胞功能有无影响,报道尚少。我们拟通过观察吸入40×10-6 NO对卵蛋白致敏大鼠的气道阻力以及气道炎症和气道淋巴细胞膜表面白介素2受体(mIL-2R)表达的影响,探讨外源性NO(吸入NO)与哮喘气道阻力及气道炎症的关系,为了解吸入NO治疗哮喘的临床应用前景提供实验资料。
材料和方法
1.主要药品与试剂: 40×10-6 NO根据400×10-6 NO标准气体(以高纯N2为母气贮存于铝合金罐内,由北京氦普气体工业有限公司提供)调配;卵蛋白(OVA)为Sigma产品;氢氧化铝［A1(OH)3］为上海金山化工厂产品;百日咳杆菌疫苗为上海生物制品研究所提供;小鼠抗大鼠mIL-2R单克隆抗体购于北京邦定医学生物公司。
2.动物模型及分组: 雄性SD大鼠30只,体重(180±45) g,分为:正常对照组(A组,6只),一次激发组(B组,6只);反复激发组(C组,6只);吸入NO 1h组(D组,6只);吸入NO 1 h/d×6 d组(E组,6只)。B、C、D、E各组大鼠的致敏参照文献［2］方法进行:腹腔注射OVA 1mg,百日咳杆菌疫苗5×109个及A1(OH)3100 mg,2周后用1%OVA生理盐水超声雾化吸入激发,每次20 min。A组以生理盐水代替抗原进行注射和雾化吸入;B组为一次激发组,于第一次雾化吸入OVA后即终止吸入。C组为反复激发组,反复雾化吸入OVA每天1次,连续6 d。D组为OVA雾化吸入后于自制密闭容器内吸入40×10-6 NO 1 h;E组为每天于1%OVA吸入后即吸入40×10-6 NO 1 h/d,连续6 d。以上各组大鼠均于生理盐水,或OVA超声雾化吸入,或吸入NO等前及吸入后10 min,用3%戊巴比妥钠进行麻醉后,用SB-40生理四导仪测定气道阻力(E组为吸入NO第6 d进行测定),然后处死大鼠,留取右肺中叶组织用于HE染色及mIL-2R的免疫组化染色。
3.免疫组化技术(ABC法)检测大鼠肺组织mIL-2R阳性细胞:取右肺中叶组织,用恒冷切片机制成20 μm切片,冷丙酮固定10 min,用ABC法［3］进行肺组织mIL-2R阳性细胞染色。用PBS取代羊抗小鼠血清作为空白对照。结果用医用TYTJ-300 图像分析系统处理,每张切片随机取10个视野,在400×光镜下测定mIL-2R阳性细胞(呈棕色)表达的积分光密度值(A值)。取10个视野的均值作为该片的代表值。
4.致敏大鼠气道炎性细胞浸润的观察: 常规HE染色,400×光镜下随机观察5个视野,计数支气管粘膜下Eos、淋巴细胞数,计算每个视野平均值。
5.统计学方法: 数据用均数±标准差(±s)表示,组间差异的显著性用t检验法检验。
结果
一、各组大鼠气道阻力变化：
由表1可见一次激发组和反复激发组激发后气道阻力均明显高于激发前(P＜0.05), 激发组激发后气道阻力均显著高于正常组(P＜0.05);吸入NO 1 h组激发后较一次激发组激发后,吸入NO 1 h/d×6 d组激发后第6 d较反复激发组激发后第6 d气道阻力均减低(P＜0.05),吸入NO组激发前后气道阻力变化无显著差异(P＞0.05)。
表1 各组大鼠气道阻力变化
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