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急性肺损伤大鼠肺组织 和 2受体及 2受体mRNA表达的变化 |
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he development of ALI. The reduction of β2-AR may be more important than that of β-AR in develepment of ALI. (2) The decrease of β2-AR mRNA expression may be one of the reasons of reduction of lung tissue β2-AR in ALI.
MeSH Endotoxins; Lung; Injuries;Receptor，adrenergic beta; Gene expression；Rats
受体及其信号传导系统在细胞间信息传导过程中起十分重要的作用。受体作为细胞的组分之一，并非静止不变而是处于动态平衡中。受体数量或功能的异常变化必将影响细胞自身及组织器官的功能，严重时就可引发或加重某些疾病过程［1］。作者既往研究发现［2］，内毒素(endotoxin, ET)性急性肺损伤(acute lung injury, ALI)时肺组织β受体数目减少，其在ALI发病中起一定作用。但有关ALI时肺组织β2受体及其基因表达的变化研究，目前尚未见报道。本研究旨在通过静脉注射内毒素复制大鼠ALI模型，检测肺组织β和β2受体及β2受体mRNA含量的变化。
材料与方法
一、实验分组及处理：
51只健康成年雄性Wistar大鼠随机分4组：(1)内毒素1 h组(n=12)。(2)内毒素4 h组(n=12)。(3)内毒素6 h组(n=12)。以上3组每只大鼠均向尾静脉注入内毒素5 mg/kg,以复制ALI模型。(4)对照组(n=15)，于尾静脉注射等量生理盐水替代ET。所有动物均于设定的时点经1%戊巴比妥钠(40 mg/kg.ip)麻醉后，行颈动脉插管放血活杀。取出肺组织称重后立即取部分肺组织投入液氮中速冻，然后置-70℃待测mRNA受体测定用新鲜肺组织样品。
二、肺组织细胞膜β和β2受体放射性配基结合分析：
将肺脏取出后切碎，依文献［3］制备肺组织细胞膜，用考马斯亮蓝法测定膜蛋白量，调配蛋白浓度为2 g/L。以［3H］-双氢烯丙洛尔(［3H］-dihydroalprenolol,［3H］-DHA比活性444×1010 Bq/mmol,美国DU PONT公司)为标记配基，非特异结合管加心得舒，β2受体结合管加β1受体特异性拮抗剂阿替洛尔(Atenolol, 美国Sigma公司)，按文献［4］做结合试验，绘饱和曲线，据Scatchard作图求受体Bmax和平衡解离常数KD。
三、肺组织β2受体mRNA含量测定：
1.β2受体cDNA探针的制备及标记：将载有仓鼠β2受体cDNA质粒(美国DUKE大学Collins博士惠赠)经电转化导入XL-lblue菌中，扩增后碱变性法提取质粒，Hind Ⅲ酶切后，电泳洗脱法回收cDNA，其片段为1.2 kb，地高辛随机引物标记探针并定量。
2.肺组织总RNA提取：按总RNA提取试剂盒说明书进行。经紫外分光光度计测RNA OD 260/OD 280并定量。
3.斑点杂交：将纯化并定量后的β2受体cDNA片段按3倍稀释法依次稀释成750，250，83.3，27.7，9.3，3.1，1.0 P g/μL浓度，杂交及定量分析依文献［5］方法进行。
四、肺体指数(lung body index，LBI)：
五、形态学观察：
首先观察肺脏大体病变，然后行HE染色光镜下观察。
六、数据处理：
所有数据均用本校统计教研室的统计软件进行方差分析和t检验。数据以均数±标准差(±s)表示。
结果
一、肺组织β及β2受体变化：
静注ET后1、4、6 h，大鼠肺组织β受体的Bmax均显著低于对照组(P＜0.01)，各ET组间差异不明显(P＞0.05)β2受体变化与β受体一致。二者的平衡解离常数KD值与对照组均无显著差异(P＞0.05)(见表1)。正常肺组织β及β2受体饱和曲线及S上一页 [1] [2] [3] 下一页
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