|
氧化修饰和乙酰修饰低密度脂蛋白在A型清道夫受体基因敲除小鼠的清除 |
| |
在动脉粥样硬化发生发展过程中起着重要作用。 机体对这一致粥样硬化因子的清除主要由肝脏的非肝主细胞完成［1］。 进一步的研究表明细胞对OX-LDL和乙酰化-LDL （acetylated LDL, AC-LDL）等化学修饰LDL的摄取主要是经AI/II型清道夫受体（type AI/II scavenger receptor）调节［2］。但配体竟争性实验提示在巨噬细胞和肝枯否氏细胞对OX-LDL的摄取除了经清道夫受体调节之外， 可能还有不同的特异性受体参与［3］。 由于清道夫受体配体间的相互交叉特性， 清道夫受体和其它参与化学修饰LDL摄取的受体的确切作用还不完全清楚。本文观察了在AI/II型清道夫受体（SR-AI/II）基因敲除小鼠OX-LDL和AC-LDL在血浆的清除率， 以了解SR-AI/II在体内清除AC-LDL、OX-LDL 中的确切作用。
材料和方法
一 、动物：
SR-AI/II基因敲除小鼠［4］由日本东京大学Kodama教授提供。在这种小鼠模型中， 没有I/II型SR-AI/II的mRNA和蛋白质产生。 实验小鼠抽样用Southern blot加以证实，以确定I/II型SR-AI/II基因敲除。
二 、方法：
（一） 脂蛋白分离和标记： 连续超速离心来自健康人EDTA抗血凝的血浆LDL (d=1.019～1.063)［5］。 应用氯化碘标记方法标记LDL。 所标记的［125I］-LDL的特异［放射性］活度为100～150 counts.min-1.ng-1， 碘标记后的LDL再经氧化、乙酰化或其他修饰。
（二）脂蛋白的修饰： 超速离心所获得的LDL在含10 μmol/L EDTA的PBS缓冲液加以透析。 标准的LDL氧化条件是：200 mg/L LDL含有5 μmol/L CuSO4, 37℃孵育20 h［6］。广泛氧化LDL孵育时间是30 h， 电泳迁移率是自然LDL的4.4倍;轻度氧化LDL孵育时间是4 h, 电泳迁移率是自然LDL的1.8倍。 乙酰化和丙二醛LDL（MAD-LDL）按文献方法［7］制备, 电泳迁移率是自然LDL的4.6倍。
（三）化学修饰LDL在小鼠血浆的清除率： 清道夫受体基因敲除小鼠用2%氟烷麻醉， 在外科显微镜下将外径0.61 mm PE导管插入上腔静脉，将20 μg的氧化、乙酰修饰或其它修饰的LDL蛋白（用［131?I，125?I］标记，1.85×104～3.7×104 Bq）与200 μL NaCl（150 mmol/L ）混合，然后注入体内。注射器在注射前后均测定其［放射性］活度，以精确注入标记LDL的量。 在注入一种LDL后， PE导管用盐水冲洗3次。 预实验显示冲洗3次后的导管仅含可忽略的［放射性］活度。注射后半小时内连续抽血7～8次， 每次大约40～50 μL血液，每份（25μL）精确地放入毛细管，测定其［放射性］活度。 当第一次注入LDL的98%［放射性］活度被清除时，第二次注入修饰或自然的LDL，以同样的方式获得血标本，血液中的［放射性］活度用LKB γ-计数仪加以测定。正常小鼠作为对照。
结果
一、在SR-AI/II基因敲除和正常小鼠中AC-LDL和OX-LDL的血浆清除率：
注入同位素标记的OX-LDL 5 min后， 血［放射性］活度从0 min的22,750 counts.min-1/25μL（Mean）左右降低到963 counts.min-1/25μL（Mean）， 血［放射性］活度降低了95%。而且在观察的20 min内，［放射性］活度一直维持在0 min血［放射性］活度的3%～5%。OX-LDL的清除率在SR-AI/II基因敲除和正常小鼠中无明显差异。 注入同位素标记的AC-LDL 5 min后， 血［放射性］活度为0 min 的5%左右，在观察的20 min内，［放射性］活度一直维持在0 min的 5%～12%左右； AC-LDL的血清除率在SR-AI/II基因敲除和对照组的小鼠类似，无明显差异。在SR-AI/II基因敲除和对照组小鼠注入同位素标记的MDA-LDL， 血清除率和AC-LDL、OX-LDL的清除率相似， 即注入5 min后， 血［放射性］活度降低95%。 静脉注射同位素标记的AC-LDL和MDA-LDL， 血［放射性］活度在5～6 min内迅速下降至最初血［放射性］活度的5%， 然后轻度上升至10%，注入同位素标记OX-LDL这一现象不明显， 血OX-LDL清除上一页 [1] [2] [3] 下一页
上一个医学论文： 实验性急性肝衰竭时门脉高压发生机制的研究
下一个医学论文： 多重耐药基因在睫状体上皮细胞容积调节中的作用
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文