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黄宏南
摘要：［目的］ 测定红曲中洛伐它丁（Lovastatin)的含量。 ［方法］ 用反相高效液相色谱法测定其含量的色谱条件。 色谱柱为 Shim-pack clc-ods 150×6.0 mm，5μm，以甲醇∶水（75∶25）为流动相，检测波长238 nm，［结果］ 线性范围在 0.586～5.86 μg之间，r＝0.9981，平均回收率为 91.6%（RSD＝1.64%，n＝5）。
关键词：红曲； 洛伐它丁； RP-HPLC； 红曲霉； 含量
中图分类号：O 657.7； TS 261.1 文献标识码： B
文章编号：1007-2705(2000)04-0040-02
自然界有红曲霉40余种，其中食用原料红曲为曲霉科真紫红色红曲霉（Monascus purpureus Went）的菌丝体及孢子。红曲经人工培养，使菌丝在粳米内部生长，整个米粒变成红色。从该菌种中分离出的菌株，经特殊条件培养，能够产生出一种具有不饱和内酯结构的代谢物洛伐它丁（Lovastatin）。这种成分为甲基羟戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂，这类化合物的化学结构中都有一个类似于HMG-CoA的基团，其作用机制可能是通过对底物的竞争达到抵制酶的催化活性，从而具有显著的降血脂作用。本文探讨了用反相高效液相色谱法测定红曲中洛伐它丁含量的色谱条件，并对提取溶剂、时间选择进行了试验。
1 实验方法
1.1 主要材料 无水乙醇、甲醇均为分析纯(福州市化工研究所提供)， 洛伐它丁标准品（福建省药检所提供），红曲样品（福建南平曲厂提供）。
1.2 主要仪器 日本岛津 LC-4A 高效液相色谱仪，SPD-2AS紫外检测器，色谱柱为 Shim-packclc-ODS 150X 6.0 mm，5 μm，cRIB色谱处理机。
1.3 色谱条件 用十八烷基键合硅胶填料为填充剂，以甲醇∶水(75∶25)为流动相，柱温50℃，流速1.3 ml/min，用紫外检测器在238 nm波长检测。
1.4 标准曲线 精密吸取对照品甲醇液（0.586 mg/ml）1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 μl进样，测其峰面积，将峰面积对应洛伐它丁含量进行回归，得曲线 y=534.77x - 1.26 (r=0.9981)。本法在0.586～5.86 μg间呈线性关系。
1.5 样品测定 精确称取红曲2 g，加75％乙醇50 ml，用超声波提取30 min，过滤、水浴氮气条件下蒸去乙醇，加甲醇溶解，移入100 ml容量瓶中，取约80 ml用超声波提取10 min，放置室温下，加甲醇至刻度、摇匀。取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液10 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。另取洛伐它丁对照品，加甲醇制成0.58 mg/ml溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算、即得。色谱图见图A、B。
图1 红曲HPLC色谱图
2 结果与讨论
2.1 精确度 取同一样品溶液，在上述色谱条件下测定6次，测定值分别为 0.91, 0.93, 0.95, 0.92, 0.96和0.97 mg/g，平均值 0.94 mg/g，RSD=1.7 ％。
2.2 准确度 取同一样品溶液（共5份），分别添加不同量的洛伐它丁标准液在上述色谱条件下测定结果见表1。
2.3 红曲测定结果 测定结果见表2。
2.4 不同溶剂提取洛伐它丁的效果 红曲中洛伐它丁提取溶剂有甲醇、乙醇、乙酸乙酯等，取同一样品，分别以不同浓度的乙醇及 75％甲醇为溶剂，分别超声振荡30 min，用 RP-HPLC 法测定洛伐它丁含量，结果表明，用 75％乙醇为溶剂，提取较完全（表3）。
表1 洛伐它丁加标回收率试验(mg)
添加量 测得量 回收率(％) RSD(％)
0.10 0.31 90.0
0.20 0.40 90.0 1.64
0.30 0.50 93.3
0.40 0.59 92.5
0.50 0.68 92.0
注:样品中洛伐它丁量均为0.22 mg。
表2 样品测定结果
批 号 洛伐它丁含量(mg/g)
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