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过氧乙酸杀灭微生物效果及稳定性实验观察 |
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黄育红 林立旺 陈路瑶 陈祖毅 王碧桑
关键词：过氧乙酸； 灭菌； 稳定性
中图分类号：R 187 文献标识码： B
文章编号：1007-2705(2000)04-0043-02
过氧乙酸，又名过醋酸，是一种广谱、高效、速效、廉价的灭菌剂。目前市售过氧乙酸多为A液、B液二元剂型，使用时将两液按一定比例混匀后放置一定时间方可使用。究竟混合后放置多少时间有效含量可以达到最高值，杀灭微生物的效果究竟如何？在实验室内，我们对混合后的过氧乙酸的含量、稳定性及杀灭微生物的效果进行了研究，现将结果报告如下：
1 方法
1.1 过氧乙酸含量测定 将A、B两液按10∶8(重量比)混匀，放置不同时间后，各取该混合液5 ml于100 ml容量瓶中，定容后，取此稀释液5 ml于100 ml碘量瓶中，加2 mol/L硫酸5 ml和10％硫酸锰3滴，用0.01 mol/L高锰酸钾溶液滴定至呈粉红色，立即加入10％碘化钾溶液10 ml和钼酸铵3滴，放暗处5 min，用0.1 mol/L硫代硫酸钠溶液滴至淡黄色加入1％淀粉溶液3滴(溶液即呈蓝色)，继续用硫代硫酸钠标准溶液滴定至蓝色消失，记录硫代硫酸钠总用量，计算过氧乙酸含量。
1.2 悬液定量杀菌试验 试验菌为大肠杆菌(8099)、枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC9372)，用含1％蛋白胨的PBS制成菌悬液，试验采用悬液法。将0.1 ml菌悬液加入盛有5 ml过氧乙酸溶液的试管中，混匀，22℃±2℃水浴至预定时间，取0.5 ml菌药混合液，加入盛有4.5 ml中和剂溶液(含0.5％硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液)的试管中，中和作用10 min后取该液以琼脂倾注法作活菌培养计数。培养温度37℃，时间48 h。
1.3 HBsAg抗原破坏性试验 采用悬液定性法。用含5％小牛血清的PBS配制成灵敏度10000倍的试验用HBsAg悬液(灵敏度经检测为2 ng/ml)。取该悬液0.1 ml加入盛有0.4 ml过氧乙酸稀释液的试管中混匀，22℃±2℃ 水浴至预定时间，立即加入0.5 ml中和剂溶液（含0.5％硫代硫酸钠及20％小牛血清的碱性磷酸盐缓冲液），混匀，经中和作用10 min后，吸取0.1 ml样液用酶联免疫吸附法进行分析检测，测出试验组OD值（S）与阴性对照组（过氧乙酸与中和剂作用产物）OD值（N）的比值S/N，当 S/N＜2.1时为HBsAg 抗原阴性。
1.4 模拟现场消毒试验 以人工染上大肠杆菌（8099）的木筷作为消毒对象。将预定量菌液滴染于受试筷子前端10 cm长度表面并涂匀，置37℃温箱干燥。将染好菌的筷子置无菌试管中，用无菌吸管吸取过氧乙酸稀释液10 ml加入试管中，使其浸泡整个染菌区，待作用至规定时间，取出置入含 0.1％硫代硫酸钠中和剂溶液中，经旋涡混合器充分洗脱后进行活菌计数。
2 结果
2.1 过氧乙酸含量测定及稳定性 将过氧乙酸A、B 两液按重量10∶8 混匀后，置于25℃±2℃条件下，过氧乙酸有效含量逐渐升高，在混合后12 h浓度为16.1％，30 h达到最高值18.1％，后又逐渐下降，到第17 d有效含量为15.9％。从混合后12 h到16 d这段时间，有效含量基本都在16％以上（见表1）。
表1 A、B 液混匀后不同时间过氧乙酸含量测定结果(%)
放置时间(h) 0 3 7 12 24 30 36 42
有效含量(%) 1.24 9.44 14.25 16.14 17.67 18.11 18.08 17.9
放置时间(d) 2 2.5 4 7 11 17 27
有效含量(%) 17.95 17.76 17.52 17.51 16.83 15.91 13.99
表2 过氧乙酸溶液的杀菌效果 （％）
对象 过氧乙酸
浓度(mg/L) 作用时间(min)
2 5 10 20 30
大肠杆菌(8099) 15
10 100.0
99.98 100.0
100.0 100.0
100.0 100.0
100.0 ／
／
5 74.15 100.0 100.0 100.0 ／
枯草杆菌黑色变种芽胞
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