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神经激肽B受体在猫三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓内的分布 |
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现的，即P物质(SP)受体(NK1)、K物质受体(NK2)和NKB受体(NK3)［2］。迄今的研究表明，神经系统内NKB及其受体NK3参与调节机体多种内脏功能活动，同时也与伤害性信息的传递和调制有密切关系。脊髓和延髓后角(三叉神经尾侧亚核)是神经系统接受外周伤害性刺激的重要区域，在形态学上弄清NK3受体在脊髓和延髓后角的分布状况，是阐明其与伤害性信息的传递和调制的关系不可缺少的。因此，本研究采用免疫组织化学技术观察了NK3受体在猫三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布状况。
材料和方法
实验共用成年家猫3只，在腹腔内注射戊巴比妥钠(100mg/kg)的深麻醉状态下，开胸经升主动脉插管，先用500 ml生理盐水冲净血液，然后用1 000 ml含4%的多聚甲醛和0.5%苦味酸的0.1 mol/L磷酸缓冲液(PB， pH7.4)灌注固定1h，灌毕取出脑干和脊髓及半月节和背根节(L7、S1)，并在上述固定液内后固定2h(4℃)，然后置于含有30%蔗糖的0.1 mol/L PB内(pH7.4)过夜。冰冻冠状切片(厚30μm)。所选取的脊髓节段为C5、T6、L2、L7和S2 5个节段。切片经0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.4)漂洗后，依此进入：(1)兔抗NK3受体(0.5mg/L，关于此抗体的制备和鉴定请参照文献［3］)；(2)生物素标记的羊抗兔IgG(Vector, 1:200);(3)ABC复合物(Vector,1:200)。其中，1抗和2抗用含0.9%驴血清和0.3%的Triton X-100的0.01mol/L的PBS(pH 7.4)稀释，ABC复合物用0.3%TritonX-100的0.001mol/L的PBS(pH 7.4)稀释。最后切片在含0.05%DAB和0.003%的H2O2的0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.6)内呈色20～30min。
对照实验在省略1抗或用正常兔血清代替1抗的情况下进行，结果为阴性。
结果和讨论
免疫组织化学染色结果显示，NK3受体样免疫反应产物在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布基本一致。
在三叉神经尾侧亚核内，致密的免疫反应产物分布于Ⅱ内层，而Ⅰ层和Ⅱ外层染色浅淡(图1)。在高倍镜下观察发现，三叉神经尾侧亚核1～Ⅲ层内分布有一定数量的NK3受体阳性神经元，绝大部分为圆形或三角形的小细胞(<10μm)，少量中等大小的神经元仅见于Ⅰ层内(图2)。此外，在Ⅲ层的外侧份还可见到由Ⅱ层延伸而来的阳性突起(图2)。在三叉神经尾侧亚核的其他部分，包括三叉脊束内均未见有阳性反应产物出现。半月节内的神经节细胞为阴性。
在所观察的脊髓节段内(C5、T6、L2、L7和S2)，NK3受体样免疫反应产物分布均与三叉神经尾侧亚核相似。致密的免疫反应产物出现于脊髓后角Ⅱ内层，其次为Ⅰ层和Ⅱ外层(图3，4)。但阳性神经元的分布与尾侧亚核不同，一是Ⅰ～Ⅲ层内阳性神经元数量少于尾侧亚核(图4)，二是在Ⅴ～Ⅶ层和中央管周围灰质(Ⅹ层)内均发现有少量散在分布的中等大小的阳性神经元。这些神经元着色浅淡，它们的突起亦呈现NK3受体样免疫反应，酷似Golgi染色外观(图5，6)。此外，在前角、胸腰节段的中间带外侧核和中央管周围灰质内还发现有一定数量的免疫反应纤维，但前角和中间带外侧核内未见有免疫反应胞体。后根节、背外侧束、后索、侧索和前索内均未发现有免疫反应产物出现。
大鼠脑内NK3受体分布的研究表明，三叉神经尾侧亚核和脊髓内NK3受体样免疫反应产物亦主要分布于Ⅱ层内［3］，且证实阳性产物定位于神经元的胞体和树突内，轴突和胶质细胞为阴性［4］。本研究发现NK3受体主要分布于猫三叉神经尾侧亚核和脊髓Ⅱ内层，这种分布上的差别可能是由于动物种属差异造成的。大鼠［3］和猫的三叉神经半月节和后根节内均无NK3受体阳性细胞，且在脊髓白质包括背外侧束及三叉神经脊束内也未观察到有NK3受体免疫反应纤维。因此，推测三叉神经尾侧亚核和脊髓尤其是浅层内NK3受体阳性神经元可能为中间神经元，而三叉神经尾侧亚核和脊髓Ⅱ内层的免疫反应结构可能主要为浅层内阳性神经元的树突。这有待免疫电镜的研究提供进一步的证据。
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