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金属硫蛋白与心肌血管内皮细胞的特异结合 |
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葛淑君 仲崇霞 程时
【摘要】 目的 探讨金属硫蛋白(MT)进入细胞的机制。 方法 以胶体金为示踪物，采用离体心脏灌流术，电镜下观察心肌血管内皮细胞对MT的摄入。 结果 心肌血管内皮细胞能特异地摄取MT。 结论 血管内皮细胞表面存在MT特异结合位点，为深入研究该蛋白的生理功能及其应用提供了重要依据。
【关键词】 金属硫蛋白 内皮细胞 特异结合位点 胶体金标记
SPECIFIC BINDING SITES OF METALLOTHIONEIN ON
ENDOTHELIAL CELLS OF SMALL VESSELS
IN MYOCARDIUM
Ge Shujun, Zhong Chongxia, Cheng ShiΔ
(Department of Biophysics,Beijing Medical University,Beijing)
【Abstract】 Objective To explore the mechanism of metallothionein (MT) entering cells.Methods Using colloidal gold labelling and isolated heart perfusion technique,uptaking process of MT by endothelial cells of small vessels in myocardium was observed by electron microscopy.Results Endothelial cells of the vessels in myocardium are able to specially uptake colloidal gold particles.Conclusion There might be specific binding sites of MT on endothelial cell surface of small vessels in myocardium,which is very important for revealing MT biological function and clinical use.
【Key words】 Metallothionein; Endothelial cell; Specific binding site; Colloidal gold labeling
金属硫蛋白(metallothionein,MT)是遍存于生物界的金属结合蛋白。其结构在进化过程中高度保守。在组织再生和发育过程中合成，说明MT参与细胞一些基本生理过程。MT除对重金属中毒有解毒功能及调节微量元素代谢作用外，还具有明显清除自由基及细胞保护作用。我们既往研究表明，经主动脉给予MT，可淬熄动物心脏缺血后再灌注时出现的氧自由基信号［1］，淬熄自旋捕集剂α-苯基-N-特丁基萘龙(PBN)捕集的心脏缺血后再灌注时出现的PBN-氧自由基加合物信号［2］。与此同时，MT对缺血后再灌注的心脏损伤有明显的保护功能［3］。由于MT中无疏水氨基酸残基，因此不易穿过生物膜。外源MT如何进入细胞而发挥细胞保护功能是个细胞生物学问题，也涉及到该蛋白的实际应用，迄今国内外对此无报道。本实验用形态学方法，以胶体金颗粒为示踪物，用电镜观察血管内皮细胞对MT的摄入，从而探讨MT在细胞膜表面的受体。
材料和方法
1. 动物
Wistar大鼠，250～300g，雄性，(北京医科大学实验动物中心提供)，随机分为5组，每组4～5只，正常饲养。
2. 试剂
氯金酸(HAuCl4)，胰岛素，牛血清白蛋白(bovine serum albunin,BSA)异型双功能交联剂N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)-丙酸酯［N-succinimidy 1-3-(2-pyridyldithio)propionate,SPDP］，购于Sigma化学公司，其余试剂为国产分析纯。金属硫蛋白(由肝中提取)为本室按Vasak方法［4，5］制备及鉴定。
3. 胶体金制备
按15nm胶体金颗粒标准制备方法［6］制备。电镜下检测时，可见金颗粒呈单个分散状态，圆形，大小均匀。符合示踪标记要求。
4. MT与BSA、胰岛素与BSA偶联
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